[發(fā)明專利]STAU2在調(diào)節(jié)禽流感病毒復(fù)制中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810282562.8
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108486103B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李慶賀;趙桂蘋;文杰;王巧;劉冉冉;鄭麥青
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6876;G01N33/68;A61K45/00;A61P31/16
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 梁婧文

本發(fā)明以禽流感H5N1A/Chicken/ShanXi/2/2006毒株cDNA為素材，利用親和純化?質(zhì)譜技術(shù)(AP?MS)，開展了病毒?宿主蛋白互作組的研究，發(fā)現(xiàn)宿主蛋白STAU2可以與H5N1禽流感病毒蛋白NS1相互作用，并且可以調(diào)節(jié)H5N1禽流感病毒的復(fù)制，當(dāng)STAU2蛋白表達量高，則H5N1病毒復(fù)制效率高，反之，當(dāng)STAU2蛋白表達量低，則H5N1病毒復(fù)制效率顯著下降。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了STAU2蛋白在調(diào)節(jié)H5N1禽流感病毒復(fù)制中的應(yīng)用，以及具體的應(yīng)用手段和應(yīng)用對象。為H5N1型禽流感病毒的預(yù)防、控制、和治療提供了有力的科學(xué)依據(jù)和操作方法，具有重大的意義和價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及STAU2基因或蛋白在調(diào)節(jié)H5N1禽流感病毒復(fù)制中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

H5N1禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)屬于高致病性流感病毒，對家禽生產(chǎn)造成巨大的威脅。禽流感病毒屬于甲型流感病毒，其遺傳物質(zhì)RNA總長度為13.6KB左右。禽流感病毒包括血凝素蛋白HA(hemagglutinin)、神經(jīng)氨酸酶NA(neuraminidase)、聚合酶蛋白PA(polymerase acidic protein)、PB1(polymerase basic protein 1)、PB2(polymerase basic protein 2)、核蛋白NP(nucleoprotein)、基質(zhì)蛋白M1(matrixprotein1)、凋亡前體蛋白NS1(non-structure protein 1)等8個基因片段。上述基因直接編碼或者其編碼的蛋白經(jīng)剪切或修飾后最多可形成17個蛋白。

非結(jié)構(gòu)蛋白NS1對于流感病毒毒力具有重要的作用，感染NS1基因敲除的流感病毒的小鼠和豬都呈現(xiàn)出較輕的癥狀(Alicia et al.,2005)，Chen等人的研究也表明NS1基因的突變會影響H5N1禽流感病毒的致病力(Chenet al.,2014)。H5N1禽流感病毒可以提高細胞炎性因子的表達量，增強病毒對細胞因子的抗性(Fan et al.,2013)。NS1蛋白C-末端四個氨基酸可以通過干擾素-非依賴性基質(zhì)增強病毒的毒力(Watanabe et al.,2012)。NS1蛋白的F103L、M106I的突變可以降低H5N1禽流感病毒的復(fù)制能力，而P42S的突變可以提高禽流感病毒對小鼠的致病性(Li et al.,2006；Wu et al.,2012)。

禽流感病毒本身不能自行復(fù)制，其復(fù)制必須依賴于宿主細胞系統(tǒng)完成。目前，關(guān)于禽流感病毒蛋白的結(jié)構(gòu)和功能等研究進展顯著，但有關(guān)禽流感病毒感染過程中與宿主的互作和關(guān)鍵宿主蛋白的鑒定還有待深入研究，這將為禽流感病毒傳播的預(yù)防和控制，禽流感疫情的預(yù)防和治療提供依據(jù)和參考。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明中，以禽流感H5N1A/Chicken/ShanXi/2/2006毒株cDNA為素材，利用親和純化-質(zhì)譜技術(shù)(AP-MS)，開展了病毒-宿主蛋白互作組的研究，發(fā)現(xiàn)宿主蛋白STAU2可以與H5N1禽流感病毒蛋白NS1產(chǎn)生相互作用，并且可以促進H5N1禽流感病毒的復(fù)制；而將STAU2蛋白的表達抑制后，H5N1禽流感病毒的復(fù)制效率將顯著降低。STAU2基因?qū)儆陔p鏈RNA結(jié)合蛋白家族的成員，該蛋白含有三個雙鏈RNA的保守結(jié)合域，可能負責(zé)mRNA在不同細胞器的定位和轉(zhuǎn)運。

本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

本發(fā)明提供了一種STAU2基因或蛋白在調(diào)節(jié)H5N1禽流感病毒復(fù)制中的應(yīng)用；提高STAU2基因或蛋白表達，可促進H5N1禽流感病毒復(fù)制；抑制STAU2基因或蛋白表達，可抑制H5N1禽流感病毒復(fù)制。在利用TCID50測定法對H5N1子代病毒的復(fù)制效率進行評價時，使用靶向STAU2的siRNA進行干擾，非干擾組H5N1子代病毒復(fù)制效率高，siRNA干擾STAU2蛋白表達導(dǎo)致H5N1病毒的復(fù)制效率顯著降低，STAU2干擾組H5N1禽流感病毒復(fù)制效率較對照組相比降低了18.3倍。

在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了一種STAU2基因或蛋白作為藥物作用靶點在抑制H5N1禽流感病毒復(fù)制中的應(yīng)用。