[發(fā)明專利]華北地區(qū)棉花蚜蟲及其寄生蜂檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810282197.0
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108359734A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發(fā)明（設計）人: 陸宴輝;楊帆
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

本發(fā)明提供了華北地區(qū)棉花蚜蟲及其寄生蜂檢測試劑盒。本發(fā)明的試劑盒包括兩個多重PCR和三個單重PCR檢測體系，兩個多重PCR檢測體系使用的特異性引物序列分別如SEQ ID NO.1?6、SEQ ID NO.7?12所示，三個單重PCR檢測體系的特異性引物序列分別如SEQ ID NO.13?18所示。本發(fā)明的試劑盒能夠對華北地區(qū)棉花蚜蟲及其8種寄生蜂實現(xiàn)準確檢測，片段大小皆在500bp以內，檢出限達1000拷貝，靈敏度高、特異性強，耗時短、簡便快速，結合單一PCR檢測技術，可獲得9?10個物種的信息，在保證檢測信息準確性和完整性的同時，快速建立蚜蟲?寄生蜂食物網(wǎng)關系，應用前景良好。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學領域，特別是涉及檢測華北地區(qū)小麥蚜蟲及其寄生蜂的試劑盒及其應用。

背景技術

棉蚜(Aphis gossypii Glover)是華北棉田主要蚜蟲種類，它通過取食韌皮部汁液，在棉花生長初期對棉田造成嚴重危害。殺蟲劑的濫用，使棉蚜產生抗藥性，在適宜其生長的環(huán)境條件下，高密度的棉蚜會使影響棉花質量大幅降低產量。因此棉蚜的防治工作應受到足夠的重視，而天敵在對棉蚜種群的控制中起到至關重要的作用。

棉蚜寄生蜂作為棉蚜的重要寄生性天敵，值得我們深入研究。而目前對棉田寄生蜂控制作用的研究，僅局限于棉田僵蚜數(shù)量、僵蚜率的調查和僵蚜樣品的采集。寄生蜂通過飼養(yǎng)出蜂到形態(tài)鑒定，不僅費時費力，而且會因為形態(tài)特征的微小模糊而很難鑒定到具體物種。為了準確評估棉田寄生蜂發(fā)生動態(tài)及其對蚜蟲的控制作用，需要建立一套快速準確的分子檢測方法，但目前未有針對棉田蚜蟲和寄生蜂的系統(tǒng)性標準檢測方法。本發(fā)明提供了一種高效便捷的分子檢測方法，利用多重PCR檢測技術靈敏度高、特異性強等特點，在同一反應中，同時檢測多個物種，根據(jù)電泳條帶大小區(qū)分不同物種，解決了棉蚜寄生蜂形態(tài)鑒定工作的制約問題，為準確鑒定物種和評估寄生蜂對蚜蟲的控制作用提供有效手段。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測華北地區(qū)棉花蚜蟲及其寄生蜂檢測試劑盒，以實現(xiàn)對華北地區(qū)棉花蚜蟲及其寄生蜂的快速檢測，為準確鑒定物種和評估寄生蜂對蚜蟲的控制作用提供有效幫助。

為實現(xiàn)上述目的，根據(jù)線粒體DNA序列，設計篩選得到9對分別針對華北地區(qū)棉花蚜蟲及其寄生蜂特異性引物，如表1。除一般的引物設計原則外，根據(jù)以下標準篩選引物：(1)擴增產物大小在100bp-500bp之間；(2)多重PCR檢測體系結果中，不同擴增產物大小相差5bp以上。

表1 引物序列信息

由此，本發(fā)明首先提供了一種檢測華北地區(qū)棉花蚜蟲(Aphis gossypii Glover)的特異性引物對，其核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示。

含有核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示的特異性引物對的試劑盒屬于本發(fā)明的保護范圍。

本發(fā)明提供一種檢測華北地區(qū)棉花蚜蟲及其寄生蜂的特異性引物對組合，含有以下引物對：

用于檢測華北地區(qū)棉花蚜蟲的特異性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13-14所示；

用于檢測煙蚜繭蜂【Aphidius gifuensis(Ashmead)】的特異性引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；

用于檢測白足蚜小蜂【Aphelinus albipodus Hayat and Fatima】的特異性引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示；

用于檢測棉刺蚜繭蜂【Binodoxys communis(Gahan)】的特異性引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示；