[發明專利]一種基于微小RNA的鑒定臍帶間充質干細胞凍存時間的基因檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810280432.0
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108486257A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 田紅青
• 申請（專利權）人: 南京千年健干細胞基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基于微小RNA的鑒定臍帶間充質干細胞凍存時間的基因檢測試劑盒，包括用于測定hsa?miR?615?3p、hsa?miR?455?5p和hsa?miR?219b?3p表達水平的qPCR引物；所述鑒定臍帶間充質干細胞凍存時間指鑒定區分凍存1～6月臍帶間充質干細胞和凍存7～12月臍帶間充質干細胞。本發明可以快速確定待測凍存臍帶間充質干細胞是凍存1～6月還是凍存7～12月的臍帶間充質干細胞。

技術領域

本發明屬于基因檢測領域，涉及一種鑒定間充質干細胞凍存時間的基因檢測試劑盒。

背景技術

間充質干細胞中最熱門、最具前景的當屬骨髓間充質干細胞和臍帶間充質干細胞。

近年來液氮冷凍保存骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞技術得到廣泛應用。然而液氮凍存細胞的缺點是其極易揮發，長期凍存會造成液氮消耗，必須及時補充。因此，很多研究機構都采用-80℃對骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞進行凍存保護(不超過12個月)。

但是，-80℃凍存時間對骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞生物學特性及增殖活力的影響還未有統一定論。一般而言，根據文獻及長期研究經驗，-80℃凍存1～6個月基本不會明顯影響骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞的生物學特性及增殖活力，而-80℃凍存7～12個月的骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞的細胞核和細胞質穩定性會變差，增殖能力和分化能力會受到較大影響，造成實驗重復性差(參考文獻：低溫凍存對人臍帶間充質干細胞生物學特性的影響，軍醫進修學院學報，2012年第33卷第11期；骨髓間充質干細胞在-80℃低溫條件下的凍存，中國組織工程研究，2016年第20卷第10期)。因此，研究者通常選用-80℃凍存1～6個月內的骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞作為種子細胞進行研究。

但是，現有技術存在如下不足：

第一，實驗室于-80℃冰箱凍存作為種子細胞的骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞常常因標簽損壞而無法確定該骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞的凍存時間；

第二，雖然可以將骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞復蘇后，通過測定其增殖活力和表型大概判斷該細胞的凍存時間，但該方法先要將凍存的骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞復蘇，然后體外培養，再測試其增殖活力和表型，耗時費力。

本發明旨在提供一種解決上述不足的技術方案，以鑒定骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞凍存時間，同時不需要對凍存的細胞進行復蘇即可操作。

發明內容

本發明目的在于提供一種鑒定骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞凍存時間的基因檢測試劑盒，以快速確定待測凍存骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞是凍存1～6月還是凍存7～12月的骨髓間充質干細胞或臍帶間充質干細胞。

上述目的通過如下技術方案實現：

骨髓間充質干細胞-長鏈非編碼RNA

一種基于長鏈非編碼RNA的鑒定骨髓間充質干細胞凍存時間的基因檢測試劑盒，包括用于測定LncRNA AK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNA AK043773表達水平的qPCR引物；所述鑒定骨髓間充質干細胞凍存時間指鑒定區分凍存1～6月骨髓間充質干細胞和凍存7～12月骨髓間充質干細胞。

優選地，所述測定LncRNA AK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNA AK043773表達水平指測定LncRNA AK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNA AK043773相對于內參U6的相對表達水平。

LncRNA AK046999的qPCR上游引物為5'-TCTAAGAGTTTCGGCGAGCACCT-3'；