[發(fā)明專利]一種基于長鏈非編碼RNA的鑒定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間的基因檢測試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810280425.0
• 申請日: 2018-04-02
• 公開（公告）號: CN108486256A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 田紅青
• 申請（專利權(quán)）人: 南京千年健干細(xì)胞基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
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本發(fā)明公開了一種基于長鏈非編碼RNA的鑒定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間的基因檢測試劑盒，包括用于測定LncRNA LINC01001、LncRNA LINC00265和LncRNA LINC00152表達(dá)水平的qPCR引物；所述鑒定臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間指鑒定區(qū)分凍存1～6月臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和凍存7～12月臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。本發(fā)明可以快速確定待測凍存臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是凍存1～6月還是凍存7～12月的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測領(lǐng)域，涉及一種鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間的基因檢測試劑盒。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞中最熱門、最具前景的當(dāng)屬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

近年來液氮冷凍保存骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞技術(shù)得到廣泛應(yīng)用。然而液氮凍存細(xì)胞的缺點是其極易揮發(fā)，長期凍存會造成液氮消耗，必須及時補充。因此，很多研究機構(gòu)都采用-80℃對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行凍存保護(hù)(不超過12個月)。

但是，-80℃凍存時間對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及增殖活力的影響還未有統(tǒng)一定論。一般而言，根據(jù)文獻(xiàn)及長期研究經(jīng)驗，-80℃凍存1～6個月基本不會明顯影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及增殖活力，而-80℃凍存7～12個月的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)穩(wěn)定性會變差，增殖能力和分化能力會受到較大影響，造成實驗重復(fù)性差(參考文獻(xiàn)：低溫凍存對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報，2012年第33卷第11期；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在-80℃低溫條件下的凍存，中國組織工程研究，2016年第20卷第10期)。因此，研究者通常選用-80℃凍存1～6個月內(nèi)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞進(jìn)行研究。

但是，現(xiàn)有技術(shù)存在如下不足：

第一，實驗室于-80℃冰箱凍存作為種子細(xì)胞的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞常常因標(biāo)簽損壞而無法確定該骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存時間；

第二，雖然可以將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇后，通過測定其增殖活力和表型大概判斷該細(xì)胞的凍存時間，但該方法先要將凍存的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇，然后體外培養(yǎng)，再測試其增殖活力和表型，耗時費力。

本發(fā)明旨在提供一種解決上述不足的技術(shù)方案，以鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間，同時不需要對凍存的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇即可操作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間的基因檢測試劑盒，以快速確定待測凍存骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是凍存1～6月還是凍存7～12月的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

上述目的通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-長鏈非編碼RNA

一種基于長鏈非編碼RNA的鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間的基因檢測試劑盒，包括用于測定LncRNAAK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNAAK043773表達(dá)水平的qPCR引物；所述鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凍存時間指鑒定區(qū)分凍存1～6月骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和凍存7～12月骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

優(yōu)選地，所述測定LncRNAAK046999、LncRNACDKN2B和LncRNAAK043773表達(dá)水平指測定LncRNAAK046999、LncRNACDKN2B和LncRNAAK043773相對于內(nèi)參U6的相對表達(dá)水平。

LncRNAAK046999的qPCR上游引物為5'-TCTAAGAGTTTCGGCGAGCACCT-3'；