[發(fā)明專利]一種基于長(zhǎng)鏈非編碼RNA的鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)的基因檢測(cè)試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810279534.0
• 申請(qǐng)日: 2018-04-01
• 公開（公告）號(hào): CN108192960A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田紅青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京千年健干細(xì)胞基因工程有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6876
• 分類號(hào): C12Q1/6876
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• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開了一種基于長(zhǎng)鏈非編碼RNA的鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)的基因檢測(cè)試劑盒，包括用于測(cè)定LncRNA CASC2、LncRNABX357664和LncRNA LINC00520表達(dá)水平的qPCR引物；所述鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)指鑒定區(qū)分P1～P5代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和P6～P10代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。本發(fā)明可以快速確定待測(cè)凍存骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是1～5代還是6～10代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)的基因檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞中最熱門、最具前景的當(dāng)屬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

人骨髓內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞含量稀少，且隨著年齡增加或體質(zhì)衰弱細(xì)胞數(shù)量會(huì)逐漸減少，因此進(jìn)行大量擴(kuò)增非常必要，但目前關(guān)于擴(kuò)增后各代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性是否相同仍無(wú)準(zhǔn)確定論。在常規(guī)培養(yǎng)條件下人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能生長(zhǎng)10代左右，結(jié)合文獻(xiàn)公開資料以及實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，1～5代增殖特性和細(xì)胞活力明顯優(yōu)于6～10代(參考文獻(xiàn)：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外連續(xù)傳代及鑒定，廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012年第15卷第1期；比較不同傳代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性，中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2009年第13卷第49期)。

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源于胚胎發(fā)育早期中胚層，具有良好的多能性，在體外誘導(dǎo)可分化成脂肪、軟骨、神經(jīng)細(xì)胞和肝細(xì)胞等多種細(xì)胞。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞比人骨髓內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞具有更好的分裂傳代能力，一般而言，研究人員可以接受1～20代內(nèi)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞用作研究的種子細(xì)胞。結(jié)合文獻(xiàn)公開資料以及實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，1～10代增殖特性、細(xì)胞活力和染色體穩(wěn)定性明顯優(yōu)于11～20代(參考文獻(xiàn)：長(zhǎng)期培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物活性及其限制性，中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011年第15卷第10期；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外傳代培養(yǎng)后細(xì)胞核型穩(wěn)定性，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013年第38卷第5期；人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外傳代遺傳特性的研究，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2015年第43卷第9期)。

為了獲得較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，研究人員通常優(yōu)選1～5代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或1～10代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞作為研究細(xì)胞。但是，現(xiàn)有技術(shù)存在如下不足：

第一，市面上購(gòu)買到的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞到底是第幾代無(wú)法確證，商家標(biāo)示信息不可信，作為種子細(xì)胞重復(fù)性差；

第二，實(shí)驗(yàn)室自己凍存作為種子細(xì)胞的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞常常因標(biāo)簽損壞而無(wú)法確定該骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的代數(shù)；

第三，雖然可以將購(gòu)買或自行留存的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇后，通過測(cè)定其增殖活力和表型大概判斷該細(xì)胞的代數(shù)，但該方法先要將凍存的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇，然后體外培養(yǎng)，再測(cè)試其增殖活力和表型，耗時(shí)費(fèi)力。

本發(fā)明旨在提供一種解決上述不足的技術(shù)方案，以鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)，同時(shí)不需要對(duì)凍存的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇即可操作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)的基因檢測(cè)試劑盒，以快速確定待測(cè)凍存骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是1～5代還是6～10代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，或快速確定待測(cè)凍存臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是1～10代還是11～20代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

上述目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞-長(zhǎng)鏈非編碼RNA

一種基于長(zhǎng)鏈非編碼RNA的鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)的基因檢測(cè)試劑盒，包括用于測(cè)定LncRNA CASC2、LncRNA BX357664和LncRNA LINC00520表達(dá)水平的qPCR引物；所述鑒定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳代次數(shù)指鑒定區(qū)分P1～P5代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和P6～P10代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。