[發明專利]一種基于微小RNA的鑒定骨髓間充質干細胞傳代次數的基因檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810279532.1
• 申請日: 2018-04-01
• 公開（公告）號: CN108486255A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 田紅青
• 申請（專利權）人: 南京千年健干細胞基因工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基于微小RNA的鑒定骨髓間充質干細胞傳代次數的基因檢測試劑盒，包括用于測定hsa?miR?378a?5p、hsa?miR?325和hsa?miR?511?3p表達水平的qPCR引物；所述鑒定骨髓間充質干細胞傳代次數指鑒定區分P1～P5代骨髓間充質干細胞和P6～P10代骨髓間充質干細胞。本發明可以快速確定待測凍存骨髓間充質干細胞是1～5代還是6～10代骨髓間充質干細胞。

技術領域

本發明屬于基因檢測領域，涉及一種鑒定間充質干細胞傳代次數的基因檢測試劑盒。

背景技術

間充質干細胞中最熱門、最具前景的當屬骨髓間充質干細胞和臍帶間充質干細胞。

人骨髓內間充質干細胞含量稀少，且隨著年齡增加或體質衰弱細胞數量會逐漸減少，因此進行大量擴增非常必要，但目前關于擴增后各代骨髓間充質干細胞的生物學特性是否相同仍無準確定論。在常規培養條件下人骨髓間充質干細胞能生長10代左右，結合文獻公開資料以及實驗經驗，1～5代增殖特性和細胞活力明顯優于6～10代(參考文獻：人骨髓間充質干細胞的體外連續傳代及鑒定，廣西中醫學院學報，2012年第15卷第1期；比較不同傳代人骨髓間充質干細胞的生物學特性，中國組織工程研究與臨床康復，2009年第13卷第49期)。

人臍帶間充質干細胞源于胚胎發育早期中胚層，具有良好的多能性，在體外誘導可分化成脂肪、軟骨、神經細胞和肝細胞等多種細胞。人臍帶間充質干細胞比人骨髓內間充質干細胞具有更好的分裂傳代能力，一般而言，研究人員可以接受1～20代內人臍帶間充質干細胞用作研究的種子細胞。結合文獻公開資料以及實驗經驗，1～10代增殖特性、細胞活力和染色體穩定性明顯優于11～20代(參考文獻：長期培養人臍帶間充質干細胞的生物活性及其限制性，中國組織工程研究與臨床康復，2011年第15卷第10期；臍帶間充質干細胞體外傳代培養后細胞核型穩定性，貴陽醫學院學報，2013年第38卷第5期；人臍帶間充質干細胞體外傳代遺傳特性的研究，現代醫學，2015年第43卷第9期)。

為了獲得較好的實驗結果，保證實驗的可重復性，研究人員通常優選1～5代骨髓間充質干細胞或1～10代人臍帶間充質干細胞作為研究細胞。但是，現有技術存在如下不足：

第一，市面上購買到的骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞到底是第幾代無法確證，商家標示信息不可信，作為種子細胞重復性差；

第二，實驗室自己凍存作為種子細胞的骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞常常因標簽損壞而無法確定該骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞的代數；

第三，雖然可以將購買或自行留存的骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞復蘇后，通過測定其增殖活力和表型大概判斷該細胞的代數，但該方法先要將凍存的骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞復蘇，然后體外培養，再測試其增殖活力和表型，耗時費力。

本發明旨在提供一種解決上述不足的技術方案，以鑒定骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞傳代次數，同時不需要對凍存的細胞進行復蘇即可操作。

發明內容

本發明目的在于提供一種鑒定骨髓間充質干細胞或人臍帶間充質干細胞傳代次數的基因檢測試劑盒，以快速確定待測凍存骨髓間充質干細胞是1～5代還是6～10代骨髓間充質干細胞，或快速確定待測凍存臍帶間充質干細胞是1～10代還是11～20代臍帶間充質干細胞。

上述目的通過如下技術方案實現：

骨髓間充質干細胞-長鏈非編碼RNA

一種基于長鏈非編碼RNA的鑒定骨髓間充質干細胞傳代次數的基因檢測試劑盒，包括用于測定LncRNA CASC2、LncRNA BX357664和LncRNA LINC00520表達水平的qPCR引物；所述鑒定骨髓間充質干細胞傳代次數指鑒定區分P1～P5代骨髓間充質干細胞和P6～P10代骨髓間充質干細胞。