[發明專利]一種高產香葉醇葡萄糖苷的大腸桿菌表達菌株及其應用

有效

• 申請號: 201810272730.5
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN110317765B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發明（設計）人: 劉濤;殷華;莊以彬;馬延和
• 申請（專利權）人: 中國科學院天津工業生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/44;C12R1/19
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種高產香葉醇葡萄糖苷的大腸桿菌表達菌株，其特征在于，所述大腸桿菌表達菌株共表達乙酰乙酰輔酶A硫解酶基因atoB、羥甲基戊二酰輔酶A合成酶基因HMGS、羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶基因tHMGR、甲羥戊酸激酶基因ERG12、磷酸甲羥戊酸激酶基因ERG8、焦磷酸甲羥戊酸脫羧酶基因MVD1、異戊烯基焦磷酸異構酶基因idi、香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*、香葉醇合成酶基因GES、香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*和糖基轉移酶基因AdGT4；

所述香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述香葉醇合成酶基因GES的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述糖基轉移酶基因AdGT4的核苷酸序列如SEQ IDNo.4所示；所述大腸桿菌為BL21(DE3)或MG1655；

所述HMGS基因的GenBank登錄號GeneID為854913；所述tHMGR基因的GenBank登錄號GeneID為854900；所述ERG12基因的GenBank登錄號GeneID為855248；所述ERG8基因的GenBank登錄號GeneID為855260；所述MVD1基因的GenBank登錄號GeneID為855779；所述atoB基因的GenBank登錄號GeneID為946727；所述idi基因的GenBank登錄號GeneID為949020。

2.權利要求1所述高產香葉醇葡萄糖苷的大腸桿菌表達菌株的制備方法，包括以下步驟：

構建共表達乙酰乙酰輔酶A硫解酶基因atoB、羥甲基戊二酰輔酶A合成酶基因HMGS、羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶基因tHMGR、甲羥戊酸激酶基因ERG12、磷酸甲羥戊酸激酶基因ERG8、焦磷酸甲羥戊酸脫羧酶基因MVD1、異戊烯基焦磷酸異構酶基因idi和香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*的第一表達載體；

構建共表達香葉醇合成酶基因GES、香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*和糖基轉移酶基因AdGT4的第二表達載體；

將所述第一表達載體和第二表達載體共同轉化大腸桿菌，獲得高產香葉醇葡萄糖苷的大腸桿菌表達菌株。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*是通過定點突變法尼基焦磷酸FPP合成酶基因ispA的核酸序列獲得；所述定點突變的引物為ispA*-P1，ispA*-P2；所述ispA*-P1的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述ispA*-P2的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*是通過定點突變法尼基焦磷酸FPP合成酶基因ERG20的核酸序列獲得；所述定點突變的引物為ERG20*-P1，ERG20*-P2；所述ERG20*-P1的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述ERG20*-P2的核苷酸序列如SEQ IDNo.8所示。

5.根據權利要求2或3所述的制備方法，其特征在于，所述第一表達載體通過將大腸桿菌表達載體pBbA5c-MevT(CO)-MBIS中的ispA基因替換為香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ispA*制備獲得。

6.根據權利要求2或4所述的制備方法，其特征在于，所述第二表達載體通過在大腸桿菌表達載體pET-duet1上連接香葉醇合成酶基因GES、香葉基焦磷酸GPP合成酶基因ERG20*和糖基轉移酶基因AdGT4制備獲得。

7.權利要求1所述的大腸桿菌表達菌株以及權利要求2~6任意一項所述制備方法制備獲得的大腸桿菌表達菌株在生產香葉醇葡萄糖苷中的應用。