[發明專利]水體中三毛金藻毒素的快速生物監測方法

有效

• 申請號: 201810269879.8
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108205053B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 封琦;王慶;韓曉磊;周子健;曹宇;王建國;王權
• 申請（專利權）人: 江蘇農牧科技職業學院
• 主分類號: G01N33/18
• 分類號: G01N33/18
• 代理公司: 北京匯知杰知識產權代理有限公司 11587
• 代理人: 楊巍;蔡倫

本發明公開了一種養殖水體中三毛金藻毒素的快速生物監測方法，包括以下步驟：(1)配制3組等體積的測試水，其中，第一組的測試水均為養殖水；第二組的測試水為由養殖水和輔助測試液組成的混合液；第三組的測試水中為由養殖水、雙蒸水和輔助測試液組成的混合液；(2)在三組測試水中分別加入數量相等的魚；(3)2小時后記錄每組中魚的死亡數，根據魚的死亡情況判斷養殖水體中三毛金藻毒素的毒性；所述輔助測試液為含3,3'?二氨基二丙胺的1M Tris緩沖液，所述3,3'?二氨基二丙胺的濃度為0.14～0.16M。該監測方法具有操作簡便、實用性強、檢測速度快、精確度高等優點。

技術領域

本發明涉及養殖技術領域，尤其涉及一種水體中三毛金藻毒素的快速生物監測方法。

背景技術

三毛金藻是一種廣鹽性藻類，其大量繁殖時，向水中分泌細胞毒素，進而使魚類和水生動物中毒死亡。三毛金藻四季都有發生，主要發生于春、秋、冬季，因這時的水溫較低，其他藻類受低溫影響，繁殖緩慢，數量較少，耐低溫的三毛金藻則成為優勢種，引起危害。三毛金藻怕陽光，故在表層水中比0.4米以下水域中三毛金藻要少得多，常規水質取樣不易觀察得到。三毛金藻的危害過程可分為三個階段：一是三毛金藻的繁殖階段，在各種水質環境適宜的情況下，三毛金藻就會大量繁殖并在細胞內合成毒素并蓄積；二是毒素的分泌和積累階段，隨著三毛金藻的大量繁殖，不斷地向水中分泌細胞毒素、溶血毒素和魚毒素等，當毒素累積到一定數量可使水生動物產生輕微的中毒反應；三是毒素的激活階段，三毛金藻分泌的毒素不能直接毒死水生動物，一旦毒素被水體中的鈣和鎂等二價陽離子激活后，毒性增強，可致使水生動物中毒死亡。另外，激活后的毒素在pH為9.0時毒性最強，pH為7.5以下毒性迅速降低，當pH為6.0時，毒性消失。金藻毒性的大小與水質理化條件以及養殖品種密切相關。三毛金藻毒素引起的魚病在全國各主要水產養殖區域均有發生，給養殖戶造成了不同程度的經濟損失。究其原因，主要是目前養殖戶對三毛金藻認識不夠，因此學術界對其研究很少，金藻毒素目前還沒成套的理化分析方法，在生產中主要依靠形態學顯微鏡檢，缺乏可靠的理化分析手段，導致無法檢測三毛金藻毒性水平，因而也就不能及時采取有效的措施。所以，有必要提供一種水體中三毛金藻毒素的快速生物監測方法，讓養殖戶能夠更好的防治三毛金藻中毒病的發生。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種操作簡便、實用性強、檢測速度快、精確度高的水體中三毛金藻毒素的快速生物監測方法。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種水體中三毛金藻毒素的快速生物監測方法，包括以下步驟：

(1)配制3組等體積的測試水，其中，第一組的測試水均為養殖水；第二組的測試水為由養殖水和輔助測試液組成的混合液，養殖水與輔助測試液的體積比為49∶1；第三組的測試水中為由養殖水、雙蒸水和輔助測試液組成的混合液，養殖水、雙蒸水和輔助測試液的體積比為10∶39∶1；

(2)在步驟(1)的三組測試水中分別加入數量相等的魚，每條魚的生理特性相同；每組測試水中魚的數量為4條；

(3)2小時后記錄每組中魚的死亡數，根據魚的死亡情況判斷養殖水體中三毛金藻毒素的毒性；判斷標準為：

若第二組中的魚全部死亡，則表明養殖水中三毛金藻毒素的濃度＝1ITU/mL，毒性較低，無須采取處理措施；

若第二組和第三組中的魚全部死亡，表明養殖水中三毛金藻毒素的濃度為5ITU/mL，毒性水平中等，須要立即采取處理措施；

若第一組、第二組和第三組中的魚全部死亡，表明養殖水中三毛金藻毒素的濃度≥25ITU/mL，毒性高水平；

所述輔助測試液為含3,3'-二氨基二丙胺的1M Tris緩沖液，所述3,3'-二氨基二丙胺的濃度為0.14～0.16M。