[發明專利]一種失憶性貝類毒素免疫親和柱及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201810269330.9
• 申請日: 2018-03-29
• 公開（公告）號: CN108325510A
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 柳家鵬;王濤;于蓉;龔利新
• 申請（專利權）人: 山東美正生物科技有限公司
• 主分類號: B01J20/281
• 分類號: B01J20/281;B01J20/30;B01D15/38;G01N30/56;G01N33/68;G01N30/60
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 白瑩;于正河

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種失憶性貝類毒素免疫親和柱及其制備方法和用途，首先將采用環氧氯丙烷活化法活化的瓊脂糖凝膠作為載體，然后將基因重組蛋白G偶聯到載體上，得到了蛋白G?sepharose，再將失憶性貝類毒素抗體連接到蛋白G?sepharose上，得到了抗體—蛋白G—sepharose，再用交聯劑進行交聯，得到了抗體—蛋白G—sepharose填料，最后將抗體—蛋白G—sepharose填料裝柱后形成了高純度和親和力的失憶性貝類毒素免疫親和柱，充分利用基因重組蛋白G與失憶性貝類毒素抗體特異性結合的特點，失憶性貝類毒素抗體的Fab片段暴露在外，大幅度提高了基因重組蛋白G的抗體結合能力、失憶性貝類毒素的捕捉能力和失憶性貝類毒素的純化效率。

技術領域：

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種失憶性貝類毒素免疫親和柱及其制備方法和用途。

背景技術：

親和柱是將與純化對象有專一結合作用的物質連接在不溶性載體上，制成親和吸附劑后所裝的柱，多用做親和層析。

失憶性貝類毒素(Amnesic shellfish poisoning，ASP)的主要成分是一種具有生理活性的氨基酸類物質-軟骨藻酸(Domoic acid，DA)，是由某些擬菱形藻屬和菱形藻屬的海洋硅藻產生的；DA是谷氨酸的一種異構體，是浮游植物代謝的產物，一種興奮性脯氨酸衍生物和神經毒素，紅藻氨酸受體的興奮劑，能夠牢固結合谷氨酸受體，作用于興奮性的氨基酸受體和突觸傳遞素，提高鈣離子的滲透性，使細胞長時間處于去極化的興奮狀態而導致死亡。當某些種類的硅藻大量發生時，雙殼貝類、蝦蟹類、頭足類等較為低等的海洋動物，就能通過攝食藻類餌料而在體內積累大量的DA，低等的海洋動物一旦被海洋哺乳類動物攝食，就可能引起海洋哺乳類動物中毒或死亡。通過對該毒素的病理學研究發現，DA能與人類中樞神經系統(大腦海馬)的谷氨酸受體結合，引起神經系統麻痹，并能導致大腦損傷；輕者引起神志不清和記憶喪失，重者引起死亡。在1987年發生愛德華王子島貝類中毒事件之后，加拿大政府就制定了貝肉中DA的限量標準。隨后，美國、歐洲、以及澳大利亞等紛紛采用歐盟標準，即20μg DA g-1貝肉；根據歐盟委員會指令(2002/226/EC)，一旦發現貝類樣品中DA含量超標，則立刻關閉養殖場或捕撈水域。過去的研究認為雙殼貝類在積累了大量DA的情況下往往沒有任何不良癥狀，但隨著研究的深入，發現赤潮毒素對雙殼貝類有多種亞致死或致死性影響；例如，產麻痹性貝毒Paralytic Shellfish Toxins(PST)的塔瑪亞歷山大藻對雙殼貝類孵化率、存活率、運動能力、濾食率和生長都有影響，同時還能抑制貝類閉殼運動、濾食率和清濾率；含有ASP的擬菱形藻P.multiserie會引起太平洋牡蠣Crassostreagigas呼吸性酸中毒和缺氧現象以及血液性質的變化；與此同時，毒藻赤潮還可能是造成養殖貝類大量死亡的主要原因。