[發(fā)明專利]一種快速檢測人類CYP2C19基因多態(tài)性的方法

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• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN110317857A
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊比特
• 申請（專利權(quán)）人: 致遠(yuǎn)醫(yī)學(xué)云檢驗(yàn)(深圳)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種快速檢測人類CYP2C19基因多態(tài)性的方法，所述方法是利用口香糖來黏附人口腔內(nèi)脫落的上皮細(xì)胞，繼而從口香糖咀嚼物中提取基因組DNA。DNA的提取包括以下步驟：將口香糖咀嚼物快速進(jìn)行研磨；置于含裂解提取液的EP管中充分震蕩混勻；金屬浴或水浴；靜置、離心后取上清；通過PCR?DNA測序相結(jié)合的方法，判斷被檢測人CYP2C19基因多態(tài)性。本發(fā)明取材方便、送檢便捷、且樣品檢測成功率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種與藥物代謝相關(guān)酶的基因的快速檢測方法，具體涉及人類CYP2C19基因多態(tài)性檢測的方法。

背景技術(shù)

細(xì)胞色素P450酶(cytochrome P450，CYP)是一類以血紅素為輔基的b族細(xì)胞色素的超家族蛋白酶，其中CYP2C19酶是細(xì)胞色素P450酶系的重要一員。CYP2C19酶基因具有高度的遺傳多態(tài)性，可以影響到許多臨床應(yīng)用藥物的代謝速率。已報道的與CYP2C19代謝相關(guān)的藥物多達(dá)24種，包括了質(zhì)子泵抑制劑、抗抑郁藥、抗癲癇藥和抗腫瘤藥等重要藥物，根據(jù)CYP2C19酶基因多態(tài)性的檢測結(jié)果，可以進(jìn)一步合理地選擇藥物劑量，從而提高療效，并降低毒副反應(yīng)的發(fā)生概率。

至今已發(fā)現(xiàn)的CYP2C19弱代謝突變基因至少有14種，等位基因有18種，為常染色體隱性遺傳，它的基因突變類型主要包括了CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17，發(fā)生率分別為30％，5％和4％，其中CYP2C19*2等位基因在第681位處堿基發(fā)生G/A突變，CYP2C19*3等位基因在第636位處堿基發(fā)生G/A突變，CYP2C19*17等位基因在第-806位處堿基發(fā)生C/T突變。由遺傳決定的CYP2C19底物的代謝多態(tài)性在人群中有四種表型，即超快代謝型(UM)、快代謝型(EM)、中代謝型(IM)和弱代謝型(PM)。超快代謝型包括兩種基因型，為(681GG，636GG，-806TT)和(681GG，636GG，-806CT)；快代謝型為(681GG，636GG，-806CC)；中代謝型包括兩種基因型，為(681GA，636GG，-806CC)和(681GG，636AG，-806CC)；弱代謝型包括五種基因型，為(681AA，636GG，-806CC)、(681AG，636AG，-806CC)、(681GG，636AA，-806CC)、(681AG，636AA，-806CC)和(681AA，636AG，-806CC)。

通常，用于CYP2C19基因多態(tài)性檢測的DNA樣品來自于人的體液(如靜脈血)和組織(如肝組織、胃黏膜等)：采外周靜脈血(EDTA抗凝)，提取基因組DNA；或胃黏膜標(biāo)本經(jīng)研磨后，對研磨液進(jìn)行離心，棄上清后進(jìn)行基因組DNA的提取。用測序法對提取的基因組DNA進(jìn)行檢測，可用以判定CYP2C19基因型的多態(tài)性。上述DNA樣品來源(體液或組織)均需要去醫(yī)院才能采集，甚至要通過有創(chuàng)手段才能獲取。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是提供一種快速檢測人類CYP2C19基因多態(tài)性的方法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服樣品采集的局限，使采集收樣過程更為簡單、快速，進(jìn)而方便后續(xù)分子生物學(xué)檢測的開展。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：利用口香糖來黏附人口腔內(nèi)脫落的上皮細(xì)胞，口香糖膠基中所含的成膜物質(zhì)具有粘性，具體的，被檢測人需在未刷牙未飲食攝水的清晨第一時間，咀嚼口香糖5-10分鐘。進(jìn)一步的，從口香糖咀嚼物中提取基因組DNA，所述DNA提取方法包括以下步驟：

(1)將口香糖咀嚼物，置于滅菌后的研缽中，加入適量液氮，快速進(jìn)行研磨，至物質(zhì)變?yōu)榉勰詈螅Ｖ寡心ィ?/p>

(2)用無菌小勺將粉末狀物質(zhì)，置于含500μl裂解提取液的EP管中，充分震蕩混勻；

(3)95℃金屬浴或水浴15分鐘；

(4)在4℃環(huán)境內(nèi)靜置30分鐘以上；

(5)4℃，12000rpm離心5分鐘后取上清，4℃或-20℃貯存?zhèn)溆谩?/p>