[發明專利]一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法

在審

• 申請號: 201810266913.6
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108186583A
• 公開（公告）日: 2018-06-22
• 發明（設計）人: 任玉琴;岑桂英;黃娟;吳春山;吳國林
• 申請（專利權）人: 寧波第二激素廠;浙江省獸藥飼料監察所
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K38/09;A61K47/26;A61P15/08;C07K7/23;C07K1/14;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/36
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐關壽;許可唯

1.一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法，包括戈那瑞林的合成、純化和注射劑的制備，其特征在于：

戈那瑞林的合成步驟如下：

（1-1）第一個氨基酸的偶聯

取1mol Rink AM 樹脂放置于室溫中復溫20min，替代度0.9mmol/g；

將復溫好的樹脂加入反應柱中，用DMF洗滌兩次，每次洗滌2min，加入DCM溶脹30min；

加入哌啶溶液脫保護兩次，按DMF、MeOH、DCM、DMF順序洗滌，每次洗滌1.5min；

在第二次脫保護的同時，取1.6mol Fmoc-Gly-OH、1.6mol偶聯試劑B，用DMF溶解，冷卻至10℃以下，加入2mol偶聯試劑A活化5 min，活化后的偶聯液加入反應釜中攪拌，于30℃反應1.5h，茚檢；茚檢合格，抽掉反應液；

加入DMF和2mol 封閉試劑AC₂O溶液，攪拌反應3小時；

（1-2）第二個氨基酸的偶聯

重復步驟（1-1）中哌啶溶液脫保護和順序洗滌，取同量的Fmoc-Pro-OH和偶聯試劑進行溶解、攪拌、茚檢和抽液；

（1-3）同步驟（1-2）依次偶聯第三至第十個氨基酸，分別為Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-His(trt)-OH、PGlu，得到戈那瑞林肽樹脂，置于不銹鋼托盤吹干；

（1-4）肽樹脂的裂解

裂解液（三異丙基硅烷：三氟乙酸：水：乙二硫醇）按比例配置并加入血清瓶中，冷卻；將戈那瑞林肽樹脂加入裂解液，磁力攪拌反應2.5h，抽濾，除渣，得濾液；將濾液加入無水乙醚中靜置20min，離心洗滌，得粗肽，烘干；

戈那瑞林粗肽的純化步驟如下：

戈那瑞林粗肽通過洗脫、轉鹽、濃縮、凍干得到純化；

戈那瑞林注射劑的制備步驟如下：

對注射劑瓶洗滌、干燥，對瓶塞清洗、滅菌、干燥；取戈那瑞林、甘露醇、右旋糖酐20溶解于配料罐中30℃以下的注射用水，攪拌混勻，用凈化壓縮空氣壓濾，半壓塞灌裝；凍干；開液壓泵，真空壓塞；軋蓋，目檢，包裝。

2.根據權利要求1所述的一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法，其特征在于：

戈那瑞林粗肽的純化步驟中，戈那瑞林粗肽用重量比各為50%的乙腈和醋酸溶液洗脫，分段收集，起峰時開始收集，純度大于96%為峰頂；醋酸溶液的濃度為0.18%。

3.根據權利要求2所述的一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法，其特征在于：

戈那瑞林粗肽的純化步驟中，經洗脫的戈那瑞林用32℃旋蒸，去除乙腈并濃縮至30~70mg/ml。

4.根據權利要求1所述的一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法，其特征在于：

戈那瑞林注射劑的制備步驟中，所述注射劑瓶放置在網帶上，經清洗后，在300℃高溫烘道干燥、滅菌，放入灌封間；所述瓶塞為膠型材料制作，膠塞經自動進料、純化水粗洗3min，純化水漂洗8min，噴淋沖洗5min、注射用水精洗8min、121℃蒸汽滅菌20min后，真空干燥，降溫，出料。

5.根據權利要求1或4所述的一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法，其特征在于：

戈那瑞林注射劑的制備步驟中，按重量組分將70%~80%右旋糖酐20、15%~20%甘露醇和適量戈那瑞林入罐，溶解于配料罐中30℃以下的注射用水。

6.根據權利要求1或4所述的一種獸用戈那瑞林注射劑的制備方法，其特征在于：

戈那瑞林注射劑的制備步驟中，凍干過程為將灌裝后的注射劑瓶移至凍干箱，冷凍至－35±1℃，保持2h，再將凍干箱降溫至－45℃以下，開啟真空泵，進行干燥。