[發明專利]生物炭負載促生菌的生物肥料及其制備方法在審
| 申請號： | 201810265786.8 | 申請日： | 2018-03-28 |
| 公開（公告）號： | CN108329105A | 公開（公告）日： | 2018-07-27 |
| 發明（設計）人： | 李勇;劉曉瑞;李佳;邸洪杰;徐建明 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C05G3/00 | 分類號： | C05G3/00 |
| 代理公司： | 杭州中成專利事務所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 生物炭 菌懸液 促生 生物肥料 產生菌 制備 菌株 恒溫震蕩 載體材料 制備生物 存活率 體積比 存活 土壤 | ||
1.生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
S1、菌懸液的制備：所述菌懸液為IAA產生菌的菌懸液；
S2、制備生物炭負載促生菌的生物肥料：在步驟S1所得的IAA產生菌的菌懸液中添加生物炭，混合均勻后于25-35℃恒溫震蕩4-8h制成生物炭負載促生菌的生物肥料；所述生物炭與IAA產生菌的菌懸液的質量體積比為1g：2-3ml。
2.根據權利要求1所述的生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于所述步驟S2為：
在步驟S1所得的IAA產生菌的菌懸液中按照1g：2.5ml的質量體積比加入生物炭，混合均勻后于30℃恒溫震搖6h，將IAA產生菌負載到生物炭上，獲得生物炭負載促生菌的生物肥料。
3.根據權利要求1或2所述的生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于：
所述步驟S1中菌懸液的制備的方法具體包括以下步驟：
1.1、將IAA產生菌的種子液按0.5-2％的接種量接種至LB液體培養基中，于25-35℃，150-200rpm恒溫振蕩培養箱中培養12-18h，制備獲得初始菌懸液；
1.2、將步驟1.1所得初始菌懸液的OD600值調節至0.7-0.9；
1.3、將步驟1.2所得初始菌懸液進行清洗后獲得菌懸液。
4.根據權利要求3所述的生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于：
所述步驟1.1中初始菌懸液的具體制備方法為：將IAA產生菌的種子液按1％的接種量接種至LB液體培養基中，于30℃，180rpm恒溫振蕩培養箱中培養16h。
5.根據權利要求4所述的生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于：
所述步驟1.3中對初始菌懸液進行清洗后獲得菌懸液的方法為：
將步驟1.2所得的初始菌懸液于3-5℃，3800-4200rpm離心20-40min后倒掉液體，再用等體積的滅菌后0.85％NaCl溶液懸浮菌體，重復進行于3-5℃，3800-4200rpm離心20-40min的清洗兩次，之后將洗凈的菌體用等體積滅菌后0.85％NaCl溶液懸浮制備菌懸液。
6.根據權利要求5所述的生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于：
所述步驟1.3中對初始菌懸液進行清洗后獲得菌懸液的具體方法為：
將步驟1.2所得的初始菌懸液于4℃，4000rpm離心30min后倒掉液體，再用等體積的滅菌后0.85％NaCl溶液懸浮菌體，重復進行于4℃，4000rpm離心30min的清洗兩次，之后將洗凈的菌體用等體積的滅菌后0.85％NaCl溶液懸浮制備菌懸液。
7.根據權利要求1-6任一所述的生物炭負載促生菌的生物肥料的制備方法，其特征在于：
所述IAA產生菌為Agrobacterium vitis NBRC 15140或Bacillus aryabhattaiB8W22；
所述生物炭為松木生物炭。
8.利用如權利要求1-7任一所述的方法制備獲得的生物炭負載促生菌的生物肥料。
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