[發明專利]一種總膽汁酸檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201810265614.0
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108220387B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 楊致亭;秦冬立;孫異凡;吳國才;戴艷霞
• 申請（專利權）人: 山東康華生物醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/32
• 分類號: C12Q1/32
• 代理公司: 濰坊正信致遠知識產權代理有限公司 37255
• 代理人: 王偉霞

本發明涉及體外診斷試劑檢測技術領域，具體涉及一種總膽汁酸檢測試劑盒，包括試劑R1和試劑R2，試劑R1包括緩沖液、表面活性劑、防腐劑、等滲調節劑和Thio?NAD；試劑R2包括緩沖液、表面活性劑、穩定劑、防腐劑、還原型輔酶I和3α?羥基類固醇脫氫酶，試劑R1中的緩沖液為甘氨酸緩沖液、檸檬酸?檸檬酸鈉緩沖液、鄰苯二甲酸氫鉀?氫氧化鈉緩沖液、PBS緩沖液等；試劑R1中的等滲調節劑為NaCl、KCl、MgCl₂中的一種或多種；試劑R2中的穩定劑為TEA、BSA、TCEP、谷胱甘肽、甘露醇等。利用本發明的試劑盒在測定特殊樣本的總膽汁酸時，可改善反應曲線，而且長時間放置穩定性良好。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑檢測技術領域，具體涉及一種總膽汁酸檢測試劑盒。

背景技術

膽汁酸是膽汁的重要成分，在脂肪代謝中起著重要作用,膽汁酸主要存在于腸肝循環系統并通過再循環起一定的保護作用,只有一少部分膽汁酸進入外圍循環,促進膽汁酸腸肝循環的動力是肝細胞的轉運系統，吸收膽汁酸并將其分泌入膽汁、縮膽囊素誘導的膽囊收縮、小腸的推進蠕動，回腸黏膜的主動運輸及血液向門靜脈的流入。

總膽汁酸(TBA)是一系列物質的總稱，具體包括膽酸(CA)、鵝脫氧膽酸(CDCA)和代謝中產生的脫氧膽酸(DCA)還有少量石膽酸(LCA)和微量熊脫氧膽酸(UDCA)。人體血清總膽汁酸(TBA)是由肝臟合成并分解代謝，從而維持人體膽汁酸的相對穩定，它的調控是肝臟的一個主要功能。當肝細胞發生病變或患膽管疾病時可引起膽汁的代謝障礙，使進入血中的膽汁酸含量顯著升高，血清TBA升高與肝細胞損傷程度成正比。

目前市售的總膽汁酸檢測試劑盒主要采用酶循環法。其反應原理是利用3α-HSD和硫代氧化型輔酶(Thio-NAD)特異性氧化膽汁酸，生成3-酮類固醇和還原性硫代氧化型輔酶(Thio-NADH)；然后在3α-HSD存在的條件下，3-酮類固醇和還原型輔酶Ⅰ(NADH)又生成膽汁酸和氧化型輔酶(NAD)，每一次循環比原來的反應提高一倍的靈敏度，如此往復循環，從而放大微量的膽汁酸，產生大量的硫代還原型輔酶Ⅰ(Thio-NADH)，最后通過測定生成的Thio-NADH的吸光度變化，測得膽汁酸的含量。

然而本公司實驗室通過大量不同廠家試劑的對比實驗發現，基于該反應原理的總膽汁酸檢測試劑盒在樣本檢測時也存在一定弊端：(1)試劑在檢測某些特殊樣本(尤其是低齡兒童血清或血漿)時，試劑R1會和樣本發生反應，造成反應曲線漂移，從而使得空白吸光度上升，造成檢測結果異常；(2)隨著試劑放置時間的延長，試劑的檢測靈敏度會降低，使因數K值升高，造成試劑的檢測穩定性下降。因此研究開發一種反應曲線更好、穩定度更高的總膽汁酸檢測試劑盒顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的在于是：針對現有技術存在的不足，提供一種反應曲線更好、穩定度更高的總膽汁酸檢測試劑盒，該檢測試劑盒在檢測特殊樣本時反應曲線波動小，并且長時間放置穩定性良好。

為了實現上述目的，本發明的技術方案是：

一種總膽汁酸檢測試劑盒，所述試劑盒包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1包括緩沖液、表面活性劑、防腐劑、等滲調節劑和Thio-NAD；所述試劑R2包括緩沖液、表面活性劑、穩定劑、防腐劑、還原型輔酶I和3α-羥基類固醇脫氫酶，其特征在于：

所述試劑R1中的緩沖液為甘氨酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉緩沖液、PBS緩沖液、GOOD’S緩沖液中的一種或多種，且所述緩沖液的pH為3.0-6.6；

所述試劑R1中的等滲調節劑為NaCl、KCl、MgCl₂中的一種或多種；

所述試劑R2中的穩定劑為TEA、BSA、TCEP、谷胱甘肽、甘露醇、海藻糖、蔗糖中的多種。

作為一種優選的技術方案，所述試劑R2中的穩定劑為BSA、TCEP和谷胱甘肽。