[發明專利]輻抗肽突變蛋白及其制備與純化方法

有效

• 申請號: 201810262142.3
• 申請日: 2018-03-28
• 公開（公告）號: CN108484738B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 葛常輝;楊剛剛;楊曉明;張全義;張全海;詹軼群;王磊;呂中原;王海濱
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院;河南新鄉華星藥廠;河南師范大學
• 主分類號: C07K14/255
• 分類號: C07K14/255;C07K1/20;C07K1/18;C12N15/31;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京驥馳知識產權代理有限公司 11422
• 代理人: 唐曉峰

1.一種輻抗肽或其突變蛋白的制備與純化方法，其特征在于，該方法采用丁基疏水層析方法進行純化，其中所述輻抗肽為輻抗肽蛋白CBLB502，所述突變蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根據權利要求1所述的制備與純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)體外合成權利要求1所述輻抗肽或其突變蛋白的cDNA，將cDNA連接到pBV220載體中，從而構建表達載體；

2)將表達載體轉化感受態大腸桿菌，構建基因表達工程菌，并誘導表達；

3)利用DEAE陰離子交換柱進行粗純化；

4)使用DEAE陰離子交換柱進行二次純化；

5)使用丁基疏水層析進行終純化。

3.根據權利要求2所述的制備與純化方法，其特征在于，丁基疏水層析是在丁基疏水色譜柱上進行的，上樣速度為3L/h～6L/h；洗脫溶液為0.7MNaCl/10mM PB，流速為6L/h。

4.根據權利要求2所述的制備與純化方法，其特征在于，所述cDNA的核苷酸序列如SEQID NO:1所示。

5.一種輻抗肽突變蛋白，其特征在于，所述突變蛋白由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列組成。

6.一種DNA序列，其特征在于，它編碼權利要求5所述的輻抗肽突變蛋白。

7.根據權利要求6所述的DNA序列，其特征在于，它由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列組成。

8.一種表達載體，其特征在于，它含有權利要求7所述的DNA序列。

9.一種宿主細胞，其特征在于，它被權利要求8所述的表達載體轉化。

10.根據權利要求9所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞是大腸桿菌JM109。