[發明專利]一種核酸分子及其在人源化抗體中的應用

在審

• 申請號: 201810261091.2
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108486126A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 劉作華;葛良鵬;丁玉春;鄒賢剛;楊松全;游小燕;劉雪芹;吳夢
• 申請（專利權）人: 重慶金邁博生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C07K16/00;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209
• 代理人: 文巍

本發明提供了一種核酸分子，包括了免疫球蛋白基因或其片段，其特征在于：包括了IgM基因（IgHCμ）和IgM轉換元件（switch region，Sμ），所述Sμ和IgHCμ全部為宿主動物序列。本發明可以直接獲得全人抗體，減少后期的人工改造并提高了抗體的成藥性。本發明轉基因的B?細胞的早期發育和成熟以及B?細胞的數量與正常小鼠完全一致，有利于B?細胞的分化；增加生產抗體的特異性和多樣性；提高篩選治療性抗體的效率。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，主要是一種核酸分子及其應用。

背景技術

全人抗體，也又稱全人源單克隆抗體，Human(Monoclonal)Antibody，是當今應用于治療腫瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反應等最重要疾病的一類生物技術產品。在全球治療性單抗中，已在歐美上市的72個單抗中，有27個是人抗體。人抗體的來源有兩個：第一：建立人的B細胞噬菌體抗體文庫，并結合噬菌體展示技術提高親和力而獲得；第二：利用轉基因動物，將動物本身的免疫球蛋白基因失活，然后轉入經過改造的部分(或全部)人的免疫球蛋白基因，利用動物的免疫機制，生產人(或部分人源)的抗體。隨著轉基因技術和B-細胞發育機制的研究清楚，人源化轉基因動物的制備更合理化，轉基因動物的B-細胞發育正常，DNA重組和突變，抗體成熟和特異性都很高。

現有的大部分轉基因抗體動物都只能產生人/鼠嵌合抗體，即抗體的重鏈的VDJ來源于人，而C-區來源于動物，在藥物研發過程中，需要進一步人源化。這個人源化的過程改變了抗體的親和力和降低抗體的成藥性。因此，從動物中直接獲得全人抗體的意義重大。

CN105441455A采用了人/宿主動物的嵌合的IgM序列，可以實現全人源化抗體的制備，但仍存在以下不足：(1)轉基因動物的早期B-細胞數量比正常小鼠少；(2)抗體的特異性和多樣性有待提高。

發明內容

本發明的目的在于解決現有技術存在的上述問題，提供一種核酸分子，其可在轉基因動物中表達全人抗體，減少后期的人工改造，同時提高了抗體的成藥性。

本發明的目的是通過以下措施實現的：

一種核酸分子，包括了免疫球蛋白基因或其片段，其特征在于：包括了IgM基因(IgHCμ)和IgM轉換元件(switch region，Sμ)，所述Sμ和IgHCμ全部為宿主動物序列。

進一步的，所述IgHCμ，包括CH1、CH2、CH3、CH4外顯子以及之間的序列和TM1、TM2、polyA信號序列。

本發明保證宿主動物的B-細胞發育和抗體成熟。

上述核酸分子，還包括了宿主動物IgH重鏈的5＇-端的增強子(5’-Enhancer)。其與Sμ和IgHCμ的結構如圖1-1所示，構建過程如圖1所示。

上述核酸分子還包括IgG基因(即Igγ)。IgG基因可以為宿主動物/人IgG嵌合元件或全人IgG序列。上述嵌合元件包括宿主動物Igγ的轉換元件(Sγ)和TM1和TM2、polyA等序列，以及人的CH1、Hinge、CH2、CH3外顯子以及之間的序列等，形成宿主/人嵌合Igγ表達調控元件。具體地，所述Igγ嵌合元件的結構如圖2-1所示，構建如圖2所示。

上述全人Igγ序列還可以包括人的轉換元件(Sγ)序列和人的Igγ的CH1、Hinge、CH2和CH3外顯子以及之間的序列，和人Igγ的終止信號(PolyA)和TM1，TM2等序列。

上述Igγ序列，可以包括人Igγ的各種亞型以及Igγ各亞型間的轉換元件(Sγ)。

比如，人Igγ亞型包括Igγ3、Igγ1、Igγ2和/或Igγ4；小鼠Igγ亞型包括Igγ3、Igγ1、Igγ2a和/或Igγ2b等。