[發明專利]一種核酸分子及其在制備人源單域抗體中的應用

在審

• 申請號: 201810261005.8
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108486125A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 葛良鵬;劉作華;吳夢;鄒賢剛;劉雪芹;游小燕;丁玉春;楊松全
• 申請（專利權）人: 重慶金邁博生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C07K16/00;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209
• 代理人: 文巍

1.一種核酸分子，包括了免疫球蛋白基因或其片段，其特征在于：包括IgG基因（Igγ）和IgG轉換元件（Sγ）和/或IgM基因（IgHCμ）和IgM轉換元件（Sμ）；其中IgM基因/IgG基因缺失CH1功能。

2.如權利要求1所述的核酸分子，所述Sμ、Sγ、IgHCμ為宿主動物序列。

3.如權利要求1或2所述的核酸分子，所述IgHCμ包括宿主動物IgM的CH2、CH3、CH4外顯子及之間的序列，以及TM1、TM2、polyA信號。

4.如權利要求1-3任一所述的核酸分子，所述IgHCμ結構如圖3-1所示。

5. 如權利要求1-4任一所述的核酸分子， 所述Igγ包括Hinge、CH2、CH3外顯子及之間的序列，以及TM1、TM2、polyA信號。

6.如權利要求1-5任一所述的核酸分子，所述TM1、TM2、polyA信號為宿主動物序列。

7.如權利要求1-6任一所述的核酸分子，所述Igγ結構如圖1-1所示。

8.如權利要求1-7任一所述的核酸分子，包括宿主動物IgH重鏈的5'-端的增強子（5’-Enhancer）。

9.如權利要求1-8任一所述的核酸分子，所述Sγ為Sγ1、Sγ3、Sγ2a和/或Sγ2b。

10. 如權利要求1-9任一所述的核酸分子，所述Sμ的核苷酸序列如SEQ ID NO.2（2550）..（4451）所示。

11. 如權利要求1-10任一所述的核酸分子，所述增強子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2的（433）..（1444）所示。

12.如權利要求1-11任一所述的核酸分子，IgG基因為宿主動物/人IgG嵌合元件或全人IgG序列。

13.如權利要求12所述的核酸分子，所述Igγ序列包括人Igγ的單種或多種亞型，和宿主動物的格種Igγ亞型的位置轉換元件（Sγ）。

14.如權利要求13所述的核酸分子，人Igγ亞型包括Igγ3、Igγ1、Igγ2和/或Igγ4。

15. 如權利要求1-14任一所述的核酸分子，包括人或宿主動物IgH重鏈的3’-位置表達調控序列（Local Control Region）。

16. 如權利要求1-14任一所述的核酸分子，包括了人IgH重鏈 V-區序列或片段，人IgHD-區序列或片段，和人IgH J-區序列或片段。

17.如權利要求1-16所述的核酸分子，其結構組成如圖6或圖7所示。

18.一種載體，包含如權利要求1-17所述的核酸分子。

19.一種細胞，包含如權利要求1-17任一所述核酸分子或權利要求18所述載體。

20.一種人源抗體，來源于權利要求1-17任一核酸分子或權利要求18所述載體或或權利要求19所述細胞。

21.權利要求1-17任一所述核酸分子或權利要求18所述載體或權利要求19所述細胞在編碼DNA、cDNA、mRNA，表達氨基酸序列、蛋白質、載體，培養雜交瘤、細胞株、轉基因動物和/或制備人源單域抗體中的應用。

22.采用權利要求1-17任一所述核酸分子或權利要求17所述載體或權利要求18所述細胞制備轉基因動物的方法，包括以下步驟：

（1）所述核酸分子的獲得；

（2）將所述核酸分子構建入載體；

（3）向宿主動物細胞或胚胎導入所述載體；

（4）將含有上述載體的細胞植入宿主動物的胚胎內或體細胞克隆；

（5）繁殖雜合、純合的轉基因動物。