[發明專利]一種內皮祖細胞的制備方法在審
| 申請號： | 201810259836.1 | 申請日： | 2018-03-27 |
| 公開（公告）號： | CN108285890A | 公開（公告）日： | 2018-07-17 |
| 發明（設計）人： | 馬穎;鄭皓鈞 | 申請（專利權）人： | 廣東顏值科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0775 | 分類號： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 張春水;唐京橋 |
| 地址： | 510627 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 內皮祖細胞 制備 擴增 單個核細胞 細胞培養 生物技術領域 細胞 培養體系 分選 臍血 分化 | ||
1.一種內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，包括：
a)將臍血進行分離，得到單個核細胞；
b)將所述單個核細胞進行細胞培養，得到擴增細胞；
c)將所述擴增細胞進行分選，得到內皮祖細胞，在培養體系中將所述內皮祖細胞進行擴增。
2.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，步驟a)所述分離為Ficoll密度梯度離心法分離；
所述Ficoll密度梯度離心法分離的離心力為200～500g；
所述Ficoll密度梯度離心法分離的離心時間為15～30min。
3.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，步驟a)所述臍血的離體時間為5～7h。
4.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，步驟c)所述分選為磁珠分選；
所述磁珠分選中，磁珠與所述擴增細胞的比例為每107～8個細胞加入20～50μL磁珠。
5.根據權利要求4所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，所述磁珠分選具體為磁珠分選CD34+CD133+細胞。
6.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，步驟b)所述單個核細胞的細胞密度為3～6×106cells/mL。
7.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，步驟b)將所述單個核細胞進行細胞培養之后，得到擴增細胞之前，還包括：
篩選貼壁細胞。
8.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的制備方法，其特征在于，步驟c)之后還包括：
進行流式檢測。
9.根據權利要求1所述的內皮祖細胞的提取和培養方法，其特征在于，步驟c)所述培養體系包括：
無血清培養基、無血清替代物、5～20ng/mL SDF-1、10ng/mL EGF和5～20ng/mL IGF。
10.權利要求9所述培養體系在制備內皮祖細胞中的應用。
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