[發明專利]多特異單克隆抗體

有效

• 申請號: 201810258801.6
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN108690132B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 格那德·弗雷;華文昌;杰·M·少特
• 申請（專利權）人: 生物蛋白有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K16/46;C12N15/10;G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;趙赫

1.一種從包含輕鏈LC1和重鏈HC1并結合抗原1的抗體以及包含輕鏈LC2和重鏈HC2并結合不同的抗原2的另一種抗體產生多特異性單鏈抗體的方法，所述方法包括以下步驟：

(a)通過以下步驟鑒別在功能上補充所述HC1和HC2重鏈的免疫球蛋白重鏈可變抗體區的單個免疫球蛋白輕鏈可變抗體區：

(i)篩選通過共表達重鏈HC1的所述免疫球蛋白重鏈可變抗體區產生的抗體文庫以及通過演化輕鏈LC1產生的人LC1文庫以得到結合所述抗原1的抗體；

(ii)篩選通過共表達重鏈HC2的所述免疫球蛋白重鏈可變抗體區產生的另一個抗體文庫以及通過演化輕鏈LC2產生的人LC2文庫以得到結合所述抗原2的抗體；

(iii)通過以下選擇抗體：

(1)共表達獲自步驟(i)的結合所述抗原1的抗體的輕鏈與重鏈HC2的所述免疫球蛋白重鏈可變抗體區并選擇出結合所述抗原2的抗體，或

(2)共表達獲自步驟(ii)的結合所述抗原2的抗體的輕鏈與重鏈HC1的所述免疫球蛋白重鏈可變抗體區并選擇出結合所述抗原1的抗體，

其中在步驟(1)或(2)中所選擇出的抗體的輕鏈可變區是在功能上補充重鏈HC1和重鏈HC2的兩個不同的免疫球蛋白重鏈可變抗體區的免疫球蛋白輕鏈可變區；

(b)克隆重鏈HC1和重鏈HC2的所述兩個不同的免疫球蛋白重鏈可變抗體區以及步驟(a)中鑒別出的免疫球蛋白輕鏈可變抗體區以形成單鏈抗體構建體；

(c)在宿主細胞中表達所述單鏈抗體構建體以產生多特異性單鏈抗體。

2.根據權利要求1所述的方法，還包括演化所述多特異性單鏈抗體中的輕鏈可變抗體區和重鏈可變抗體區以改善所述多特異性單鏈抗體的一種或多種特性的額外步驟。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述一種或多種特性選自：平衡解離常數(K_D)、穩定性、解鏈溫度(T_m)；pI、溶解度、表達水平、降低的免疫原性和改善的效應器功能。

4.根據權利要求2所述的方法，其中，所述額外的演化步驟包括以下的一種或多種：綜合位置演化(CPE)；綜合位置插入演化(CPI)、綜合位置缺失演化(CPD)；由組合蛋白合成(CPS)跟隨的綜合位置演化(CPE)；以及由組合蛋白合成(CPS)跟隨的綜合位置缺失演化(CPD)。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，還包括使所述多特異性單鏈抗體與有機部分綴合以產生綴合的多特異性單鏈抗體的步驟。

6.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述多特異性單鏈抗體特異性地結合3個表位、或4個表位、或5個表位、或更多個表位。

7.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述宿主細胞是真核宿主細胞系，所述真核宿主細胞系選自：3T3小鼠成纖維細胞；BHK21敘利亞倉鼠成纖維細胞；MDCK、犬上皮細胞；Hela人體上皮細胞；PtKl大鼠袋鼠上皮細胞；SP2 / 0小鼠漿細胞；NS0小鼠漿細胞；HEK293人胚胎腎細胞；COS猴腎細胞；CHO、CHO-S中國倉鼠卵巢細胞；Rl小鼠胚胎細胞；E14.1小鼠胚胎細胞；HI人類胚胎細胞；H9人類胚胎細胞；PF.R C.6.人類胚胎細胞；釀酒酵母(S.cerevisiae)細胞；以及畢赤(picchia)酵母細胞。

8.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述宿主細胞是原核宿主細胞。

9.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，還包括制造所述多特異性單鏈抗體的步驟。