[發明專利]人正常結膜上皮細胞及其用途

有效

• 申請號: 201810258760.0
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108285887B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 葉琳;李暉;王玲;魏高斌;葉立娜;于莉;王媛;殷國干
• 申請（專利權）人: 深圳市眼科醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/079;C12Q1/02
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

本發明公開了人正常結膜上皮細胞及其用途。該細胞命名為人正常結膜上皮細胞HNCEC/HL?043，保藏編號為CCTCC NO：C201676。其原代分離培養的方法為：胬肉手術患者眼球顳側正常結膜組織樣品，經過消化后加入分散酶和DNase I作用，通過過濾、離心收集細胞，再用HL培養基重懸細胞，接種培養。其傳代培養的方法為：細胞增殖至70～90%豐度時，用胰酶?EDTA消化，再用DMEM中和；離心收集細胞，用HL培養基重懸細胞，接種培養。本發明的細胞可用于人正常細胞的生理學研究，藥物藥敏及毒性檢測系統中，結膜相關疾病包括干眼癥，過敏性結膜炎的發病機理研究。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，涉及一種人正常結膜上皮細胞及其用途。

背景技術

人體重要器官如肺、腎、肝、胰腺和皮膚都由器官特異性分化的上皮細胞為其組成成分。這些特異性分化的上皮細胞與不同器官的特異性功能直接相關，如肺的氣體交換功能、腎的過濾功能、肝的解毒及中和功能、胰腺細胞產生胰島素、皮膚具有保護機體免受外界環境的傷害。而這些重要器官一旦發生病變或退化就會威脅人類的健康，因為這些重要器官是很難被替換的，不同器官的特異性細胞也不能相互取代其它器官的細胞。這些特異性分化的細胞都是很難再生的，更不要說在體外進行培養增殖了。這樣大大限制了人們對機體正常細胞功能的認識，很多來自于科技文獻甚至教科書的細胞生物學知識的描述是不準確甚至是錯誤的。真正的原因是多數正常細胞的生物學知識來源于體外培養的細胞系研究結果。盡管各國科學家始終不斷的嘗試著培養和增殖人體重要器官的功能性的上皮細胞，但是，對于分離自人和哺乳動物的原代上皮細胞的體外培養仍然是很困難的。應用目前的無血清培養基，有的只能進行短期的原代培養(存活數天，如肺和胰腺等上皮細胞)，有的只能進行有限的傳代培養(1-3代，如氣管/角膜及前列腺等上皮細胞)，有的甚至根本不能體外培養(如肝、結腸、前列腺等上皮細胞)，只有來自于人體皮膚的角化上皮細胞可以傳代培養10代左右。而且從每個動物或活體組織樣品中獲得的上皮細胞產量仍然很低，包括細胞的數量、直接分離或短期培養的細胞純度都是很低的，這些原代和傳代上皮細胞的增殖速度也極為有限。

為了在體外進行上皮細胞的培養，目前國外嘗試通過遺傳操作，如轉入病毒(SV40T或HPV16E6E7)或細胞癌基因，可以延長體外細胞存活的代數。然而遺傳操作的最大缺點是會改變這些細胞的遺傳背景和表型，以致讓這些正常上皮細胞丟失其正常生理功能，如p53和pRB信號通路常常被抑制。而且，這些經遺傳修飾的細胞是不可能重新再移植進機體的。但是由于目前缺乏有效的體外培養上皮細胞的技術，上述這些細胞在當今世界的醫學和生命科學研究中仍然備受青睞。在非癌癥研究領域，它們就代表著最初來源的“功能”性的組織或器官。現階段，國內外還從未有過“正常細胞”可以應用于基礎和臨床醫學研究。

正常人結膜上皮細胞主要功能為分泌淚液以及粘液，保持眼部濕潤。人結膜上皮細胞與眼部生理疾病有關，如過敏性結膜炎、干眼癥。如果能獲得體外穩定傳代的人正常結膜上皮細胞，將使人們可以更全面地研究結膜上皮細胞的正常功能，結膜相關疾病發病機理，這些都將對基礎和臨床醫學研究與應用有重大意義。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種人正常結膜上皮細胞。該細胞分離培養自中國人的正常結膜組織，該細胞未導入任何外源基因，為正常二倍體細胞，基因分型鑒定為國內外從未登記注冊過的一種人的正常細胞系。

本發明的另一目的在于提供上述人正常結膜上皮細胞的用途。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：