[發明專利]一種快速診斷以色列急性麻痹病毒試紙及其應用

有效

• 申請號: 201810256316.5
• 申請日: 2018-03-27
• 公開（公告）號: CN108318683B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 侯春生;刁青云;楊卅;吳艷艷;代平禮;王強;劉永軍;高晶
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蜜蜂研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳;李巍

1.一種蜜蜂以色列急性麻痹病毒抗體膠體金快速檢測試紙條，包括支撐層，以及在所述支撐層上依次設置的加樣墊、金標抗原釋放墊、檢測層和吸收層，其特征在于，所述金標抗原釋放墊包埋有膠體金標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2；所述檢測層上設置有檢測帶和質控帶，所述檢測帶固定有以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2，所述質控帶固定有以色列急性麻痹病毒核衣蛋白VP2兔多克隆抗體；所述以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2序列如序列表中序列2所示；所述以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2是將序列表中序列1所示的核苷酸片段插入到pEASY載體中表達后純化得到的；所述的支撐層為聚氯乙烯板；所述的加樣墊為中速定性濾紙；所述的金標抗原釋放墊為玻璃纖維素膜；所述的檢測層為硝酸纖維素膜；所述的吸收層為玻璃纖維；

所述檢測試紙條的制備方法，其包括如下步驟：

1)將包被濃度為0.1～1mg/mL的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2按2μL/cm的速度噴于檢測層上作為檢測帶，將包被濃度為0.1～5mg/mL的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2兔多克隆抗體按1μL/cm的速度噴于檢測帶下方的檢測層上作為質控帶，37℃下干燥30min，從而制備檢測層；

2)制備金標抗原釋放墊：以1:100-3000的標記比例將待標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2加入到pH7.0～10.0膠體金溶液中，按1:10～500的比例用含0.1～5％BSA的0.001～0.1mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋膠體金標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2，將稀釋后的膠體金標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2液按100μL/cm²的速度噴于玻璃纖維素膜中，4℃低溫真空干燥；

3)組裝支撐層、加樣墊、制備金標抗原釋放墊、檢測層和吸收層。

2.一種制備權利要求1所述檢測試紙條的方法，其包括如下步驟：

1)將包被濃度為0.1～1mg/mL的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2按2μL/cm的速度噴于檢測層上作為檢測帶，將包被濃度為0.1～5mg/mL的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2兔多克隆抗體按1μL/cm的速度噴于檢測帶下方的檢測層上作為質控帶，37℃下干燥30min，從而制備檢測層；

2)制備金標抗原釋放墊：以1:100-3000的標記比例將待標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2加入到pH7.0～10.0膠體金溶液中，按1:10～500的比例用含0.1～5％BSA的0.001～0.1mol/L磷酸鹽緩沖液稀釋膠體金標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2，將稀釋后的膠體金標記的以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2液按100μL/cm²的速度噴于玻璃纖維素膜中，4℃低溫真空干燥；

3)組裝支撐層、加樣墊、制備金標抗原釋放墊、檢測層和吸收層。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2的包被濃度為0.5mg/mL，以色列急性麻痹病毒核衣殼蛋白VP2兔多克隆抗體的包被濃度為1mg/mL。