[發(fā)明專利]一種芡實(shí)種仁多糖及其分離提取方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810255095.X
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108424469B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文娜;陳彥;蘇日娜;楊維維;王亞;潘文娟;陸永明
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P3/10;A23L33/125
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 喬恒婷

本發(fā)明公開了一種芡實(shí)種仁多糖及其分離提取方法和用途，其中芡實(shí)種仁多糖的分子量為8.75ⅹ10³Da，單糖組成及摩爾比為葡萄糖醛酸：甘露糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖＝0.55：0.6：52.7：1：4.3。本發(fā)明芡實(shí)種仁多糖可以促進(jìn)胰島素抵抗細(xì)胞的葡萄糖攝取量，具有研發(fā)降血糖保健食品和藥物的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種芡實(shí)種仁多糖及其分離提取方法和用途，屬于天然產(chǎn)物提取和生物活性領(lǐng)域。

背景技術(shù)

Ⅱ型糖尿病(T2DM)是一種以高血糖為特征的糖代謝紊亂的疾病。近年來糖尿病患病率迅猛增長，據(jù)統(tǒng)計(jì)2010年中國糖尿病患病率已高達(dá)9.7％，患者人數(shù)達(dá)到了9240萬，預(yù)計(jì)到2030年將增至1.29億。因此，T2DM的防治已經(jīng)成為影響中國公民健康的重要問題之一。糖尿病的主要發(fā)病機(jī)制是由于胰島功能缺失或受損引起，既有遺傳因素也有環(huán)境因素包括后天飲食、作息習(xí)慣、肥胖等影響引起胰島素分泌不足，常常伴有胰島素抵抗現(xiàn)象發(fā)生。

芡實(shí)(Eureyale ferox Salisb)是睡蓮科(Nymphaeaceae)芡屬(Euryale)一年生水生草本植物。野生芡實(shí)全國各地分布比較廣，人工栽培主要以江蘇、浙江和安徽等省為主。芡實(shí)成熟種仁含有豐富的基本營養(yǎng)成分，有碳水化合物、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)和維生素等，功效成分主要有黃酮類、環(huán)肽類、酚類、多糖、甾醇類和腦苷脂等成分。傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)上，芡實(shí)的成熟種仁具有益腎固精，有健脾利濕作用，常用于治療遺精遺尿，脾虛久泄，白濁帶下。文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，芡實(shí)粗提取物主要有抗氧化、抗心肌缺血、抗衰老、降血糖、降血壓及抑菌、保護(hù)胃粘膜等作用。然而關(guān)于芡實(shí)多糖的研究還比較少，只有抗氧化活性方面的報(bào)道，目前尚未有芡實(shí)種仁多糖結(jié)構(gòu)鑒定及降糖方面的活性報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種芡實(shí)種仁多糖及其分離提取方法和用途。本發(fā)明芡實(shí)種仁多糖可以促進(jìn)胰島素抵抗細(xì)胞的葡萄糖攝取量，天然無毒，具有研發(fā)降血糖保健食品和藥物的應(yīng)用前景。

本發(fā)明芡實(shí)種仁多糖，分子量為8.75ⅹ10³Da，單糖組成及摩爾比為葡萄糖醛酸：甘露糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖＝0.55：0.6：52.7：1：4.3。本發(fā)明芡實(shí)種仁多糖的分離提取方法，包括如下步驟：

步驟1：分離提取

將成熟的芡實(shí)種仁粉碎成粉末，加入3-5倍體積的蒸餾水超聲提取5min，然后于60℃水浴2h，四層紗布過濾，收集上清液，向?yàn)V渣中加入蒸餾水重復(fù)上述提取過程再次提取，合并上清液；將所得上清液旋蒸濃縮，然后加入四倍體積的無水乙醇4℃下靜置沉淀，離心收集沉淀，加水溶解沉淀即得粗多糖水溶液；加水量使沉淀剛好完全溶解即可。

步驟2：sevag法脫蛋白

將步驟1獲得的粗多糖水溶液、三氯甲烷和正丁醇按照體積比5：4：1的比例混合，磁力攪拌2-3h，離心后收集上清液；重復(fù)上述處理步驟直至蛋白質(zhì)完全去除，獲得脫蛋白芡實(shí)種仁多糖溶液；

步驟3：透析除雜

將步驟2獲得的脫蛋白芡實(shí)種仁多糖溶液旋蒸濃縮除去有機(jī)試劑，使用3500KDa的透析袋，流水透析48h，蒸餾水透析24h，再次旋蒸濃縮至濃稠狀液體，真空冷凍干燥，即得芡實(shí)種仁粗多糖；

步驟4：純化

將步驟3獲得的芡實(shí)種仁粗多糖通過Superdex^TM75葡聚糖凝膠柱洗脫分離，以蒸餾水為洗脫液，使用高效液相色譜跟蹤檢測分離效果，收集保留時(shí)間相同的多糖，濃縮凍干后即得芡實(shí)種仁純多糖。