[發(fā)明專利]一種紙基微流控芯片及基于其的磷酸化多肽的富集檢測方法

有效

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• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號: CN110354920B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李麗萍;張璐;耿藝萌
• 申請（專利權(quán)）人: 首都師范大學(xué)
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00;G01N21/78
• 代理公司: 北京展翅星辰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11693
• 代理人: 王文生

1.一種紙基微流控芯片，由紙基材料、疏水封閉材料、磷酸基團親和試劑和顯色試劑組成，其特征在于，利用常用的紙基芯片制作方法，使紙基材料由疏水封閉材料阻隔形成液流通道、富集區(qū)、顯色區(qū)和吸水區(qū)，親和試劑修飾在富集區(qū)用于特異性結(jié)合磷酸化多肽，顯色試劑滴加在顯色區(qū)，其顏色的變化可以指示磷酸化多肽的存在, 芯片結(jié)構(gòu)包括第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5），第二部件（2）、第三部件（3）和第四部件（4）的材質(zhì)為whatman1#濾紙，第一部件（1）和第五部件（5）的材質(zhì)為聚丙烯膜，第一部件（1）為上層蓋膜，其上用打孔器打出四個直徑為3 mm的孔，分別對準第三部件（3）的左右兩端和第二部件（2）的上下兩端；第三部件（3）為多肽富集通道，長1.5 cm，其中心區(qū)域經(jīng)過二氧化鈦顆粒修飾，用于特異性結(jié)合磷酸化蛋白或多肽；第二部件（2）為顯色通道，長0.75 cm，其上端滴加有0.5微升3.3 mM的溴酚藍和1微升250 mM的檸檬酸緩沖液，在遇到蛋白質(zhì)或多肽時由黃色變?yōu)樗{色；第四部件（4）為廢液收集區(qū)，長1.5 cm，寬1.2 cm，其下端與第二部件（2）的上端相接，不斷吸收廢液，同時也為液體的流動提供驅(qū)動力；第五部件（5）為下層蓋膜，其上用打孔器打出兩個直徑為3 mm的孔，分別對準第三部件（3）的左右兩端；將第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5）順序放置，利用第一部件（1）和第五部件（5）將第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）封裝固定，從而得到由whatman1#濾紙和聚丙烯膜制作的紙基微流控芯片。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紙基微流控芯片，其特征在于，所述紙基材料為由惰性纖維素形成的、具有毛細結(jié)構(gòu)的、可以吸水的潔凈紙材。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的紙基微流控芯片，其特征在于，所述疏水封閉材料為易加工的易與所述紙基材料結(jié)合的疏水材料。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的紙基微流控芯片，其特征在于，所述磷酸基團親和試劑為與磷酸基團具有特異性親和作用的金屬氧化物、固定化金屬離子、抗體試劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的紙基微流控芯片，其特征在于，所述顯色試劑為遇到肽段會發(fā)生顏色改變的試劑。

6.一種基于紙基微流控芯片的磷酸化多肽的富集檢測方法，其特征在于，使用如下紙基微流控芯片，該紙基微流控芯片由紙基材料、疏水封閉材料、磷酸基團親和試劑和顯色試劑組成，其特征在于，利用常用的紙基芯片制作方法，使紙基材料由疏水封閉材料阻隔形成液流通道、富集區(qū)、顯色區(qū)和吸水區(qū)，親和試劑修飾在富集區(qū)用于特異性結(jié)合磷酸化多肽，顯色試劑滴加在顯色區(qū)，其顏色的變化可以指示磷酸化多肽的存在, 芯片結(jié)構(gòu)包括第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5），第二部件（2）、第三部件（3）和第四部件（4）的材質(zhì)為whatman1#濾紙，第一部件（1）和第五部件（5）的材質(zhì)為聚丙烯膜，第一部件（1）為上層蓋膜，其上用打孔器打出四個直徑為3 mm的孔，分別對準第三部件（3）的左右兩端和第二部件（2）的上下兩端；第三部件（3）為多肽富集通道，長1.5 cm，其中心區(qū)域經(jīng)過二氧化鈦顆粒修飾，用于特異性結(jié)合磷酸化蛋白或多肽；第二部件（2）為顯色通道， 長0.75 cm，其上端滴加有0.5微升3.3 mM的溴酚藍和1微升250 mM的檸檬酸緩沖液，在遇到蛋白質(zhì)或多肽時由黃色變?yōu)樗{色；第四部件（4）為廢液收集區(qū)，長1.5 cm，寬1.2 cm，其下端與第二部件（2）的上端相接，不斷吸收廢液，同時也為液體的流動提供驅(qū)動力；第五部件（5）為下層蓋膜，其上用打孔器打出兩個直徑為3 mm的孔，分別對準第三部件（3）的左右兩端；將第一部件（1）、第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）和第五部件（5）順序放置，利用第一部件（1）和第五部件（5）將第二部件（2）、第三部件（3）、第四部件（4）封裝固定，從而得到由whatman1#濾紙和聚丙烯膜制作的紙基微流控芯片；該方法包括如下步驟：步驟一：樣品溶液的引入；步驟二：富集區(qū)的清洗；步驟三：磷酸化多肽的洗脫；步驟四：顯色。