[發(fā)明專利]用于龜紋瓢蟲多樣性分析的SSR引物及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810252208.0
• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號: CN108315438B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張利娟;崔金杰;雒珺瑜;張帥;馬妍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發(fā)明提供一套用于龜紋瓢蟲多樣性分析的SSR引物，所述SSR引物選自以下19對引物pro444、pro524、pro3422、pro4078、pro3621、pro3595、pro6393、pro8136?3、pro8823、pro1546、pro1582、pro5238、pro1517、pro1600、pro523、pro322?2、pro3848、pro5087和pro8461中的至少一個(gè)。本發(fā)明還提供所述SSR引物在龜紋瓢蟲遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)及譜系地理格局分析中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的SSR引物具有特異性強(qiáng)、擴(kuò)增結(jié)果穩(wěn)定、各位點(diǎn)間不存在連鎖不平衡現(xiàn)象、多態(tài)性高等特征，這些分子標(biāo)記可應(yīng)用于龜紋瓢蟲種群遺傳、系統(tǒng)進(jìn)化、基因定位、分子鑒定等相關(guān)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及用于龜紋瓢蟲多樣性分析的SSR引物及應(yīng)用。

背景技術(shù)

微衛(wèi)星DNA(SSR)，即簡單序列重復(fù)，在整個(gè)基因組中分布廣泛。同一類型的微衛(wèi)星序列由于重復(fù)次數(shù)或重復(fù)程度的差異，從而在每個(gè)座位上產(chǎn)生多態(tài)性。由于微衛(wèi)星序列的兩端具有高的保守性，使特異性引物的設(shè)計(jì)變得非常方便。該分子標(biāo)記由于具有高的多態(tài)信息含量，呈共顯性遺傳，可用于種群歷史的重現(xiàn)等特性，使其廣泛在種群遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)及譜系地理格局研究中應(yīng)用。

龜紋瓢蟲Propylea japonica(Thunberg)屬于半翅目瓢蟲科(Coleoptera：Coccinellidae)，是一種在我國分布較廣的捕食性天敵昆蟲，因其具有較強(qiáng)的耐饑餓、抗高溫和干旱的能力，同時(shí)對田間害蟲，例如棉蚜、桃蚜、葉螨等昆蟲種類具有較好的防控作用，目前已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中非常具有應(yīng)用前景的天敵種類之一。現(xiàn)階段通過對龜紋瓢蟲進(jìn)行田間保護(hù)和釋放以實(shí)現(xiàn)“以蟲治蟲”的防治方法已經(jīng)在生物防治過程中發(fā)揮了較重要的作用。

關(guān)于該種類前期生物學(xué)方面的研究主要集中于生物學(xué)特性、生態(tài)學(xué)特性、生物防治、人工飼料飼養(yǎng)等方面，分子方面近年來集中于轉(zhuǎn)錄組、功能基因的表達(dá)及驗(yàn)證、殺蟲劑抗性基因篩選等方面；而關(guān)于遺傳多樣性分析、種群遺傳結(jié)構(gòu)研究、相關(guān)引物篩選等方面的研究相對較少，因此本發(fā)明致力于篩選出擴(kuò)增效果好、特異性強(qiáng)、擴(kuò)增特征穩(wěn)定、多態(tài)性好的微衛(wèi)星引物，為上述遺傳研究提供一定的方法基礎(chǔ)，從而為盡快的了解和認(rèn)識龜紋瓢蟲種質(zhì)資源現(xiàn)狀，明確有效種群大小，以及龜紋瓢蟲的有效保護(hù)和合理利用提供重要的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一套用于龜紋瓢蟲多樣性分析的SSR引物及應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的用于龜紋瓢蟲多樣性分析的SSR引物，所述SSR引物選自pro444、pro524、pro3422、pro4078、pro3621、pro3595、pro6393、pro8136-3、pro8823、pro1546、pro1582、pro5238、pro1517、pro1600、pro523、pro322-2、pro3848、pro5087和pro8461中的至少一個(gè)；各SSR引物的信息如表1所示：

表1

本發(fā)明還提供用于龜紋瓢蟲多樣性分析的SSR引物組合，所述SSR引物組合包括表1中所述的19對SSR引物。

本發(fā)明還提供含有表1所述SSR引物或其引物組合的檢測試劑或試劑盒。

本發(fā)明還提供所述SSR引物單獨(dú)或組合使用在龜紋瓢蟲遺傳多樣性分析中的應(yīng)用。包括以下步驟：

1)提取待測樣品的基因組DNA；

2)以提取的DNA為模板，利用表1所述SSR引物進(jìn)行PCR反應(yīng)；

3)分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

優(yōu)選地，PCR擴(kuò)增體系為：2×Taq PCR Master Mix反應(yīng)緩沖液12.5μL，10μM上、下游引物各1μL，DNA模板1-2μL，無菌水補(bǔ)足至25μL。