[發明專利]鱖魚伽瑪干擾素相關因子及其重組蛋白和應用

有效

• 申請號: 201810251632.3
• 申請日: 2018-03-26
• 公開（公告）號: CN108264548B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 聶品;李麗;陳善楠;李楠
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C07K14/57
• 分類號: C07K14/57;C12N15/23;C12N15/11;C12N15/70;A61K38/21;A61P37/04
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于生物技術領域，具體公開了鱖魚伽瑪干擾素相關因子及其重組蛋白和應用，本發明通過設計兼并引物擴增得到IFN?γrel基因片段，race的方法擴增得到完整基因序列，以IFN?γrel?ORF?F和IFN?γrel?ORF?R為引物，以鱖的頭腎和腸混合組織總RNA為模板擴增得到IFN?γrel基因的完整開放閱讀框，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，對應編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明的IFN?γrel重組的蛋白經初步驗證能夠誘導免疫相關基因Mx，IRF1，STAT1以及SOCS1的上調表達，可作為魚類免疫增強劑或者免疫佐劑。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及鱖魚伽瑪干擾素相關因子及其重組蛋白和應用。

背景技術

1957年英國科學家Isaacs在利用雞胚絨毛尿囊膜研究流感病毒干擾現象時首先發現干擾素(Interferon,IFN)，隨后研究發現它是一種在先天性免疫和獲得性免疫中起著重要作用的細胞因子，具有抑制細胞分裂、調節免疫、抗病毒、抗腫瘤等多種作用。干擾素廣泛存在于脊椎動物中。根據基因結構，受體類型以及功能等的不同，將其可以分為I型、II型和III型。目前在魚類中發現只存在I型和II型干擾素，至今沒有III型干擾素的報道。

哺乳動物的II型干擾素只有一個成員，即伽瑪干擾素(IFN-γ)，主要由CD4+輔助T淋巴細胞，CD8+細胞毒性T細胞和自然殺傷細胞產生(Shtrichman et al.,2001)。隨后研究發現B細胞，抗原遞呈細胞等也可以產生IFN-γ。IFN-γ通過受體介導下游效應基因的表達從而實現其生物學功能，包括抗病毒，抗菌，免疫調節等。已有報道顯示硬骨魚類II型干擾素中有兩個成員，即IFN-γ和伽瑪干擾素相關因子(IFN-γrel)。近幾年在鯉形目(Cypriniformes)，鮭形目(Salmoniformes)以及鱸形目(Perciformes)魚類中報道了IFN-γ。研究發現魚類的IFN-γ對于機體抵抗病原感染也具有非常重要的作用。但IFN-γrel似乎是硬骨特有的基因，目前對于此基因的報道還很少，近幾年在鯉科魚以及一些模式魚類中有IFN-γrel基因的報道，而對于它的功能目前研究還很少。特別是鱸形目中是否存在IFN-γrel基因目前并不清楚。

鱸形目魚類的一些種類，如我國重要的淡水養殖對象鱖(Siniperca chuatsi)，具有較高的經濟價值。隨著養殖規模的不斷擴大以及養殖環境的變化，鱖的病害頻繁發生，給養殖業造成了重大的經濟損失，病害問題已嚴重困擾著鱖養殖的發展。目前在魚類中報道的免疫增強劑來源包括人工合成、微生物來源及動植物來源。近年來隨著魚類細胞因子研究的深入，生物活性因子類免疫增強劑也受到了極大地關注。

目前未見有關鱖魚中IFN-γrel基因序列及功能的報道。本發明通過基因克隆方法得到了鱖IFN-γrel，重組的IFN-γrel蛋白能夠誘導抗病毒等免疫相關基因的上調表達，參與各種病原誘發的免疫過程。因此其作為免疫增強劑具有很好的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供了鱖魚伽瑪干擾素相關因子(IFN-γrel)，所述的鱖魚伽瑪干擾素相關因子的氨基酸序列為SEQ ID NO.2所示，對應的核苷酸序列為SEQ ID NO.1所示。

本發明的另一個目的在于提供了鱖魚伽瑪干擾素相關因子在制備鱖魚免疫調節劑中的應用。

本發明還有一個目的在于提供了含有鱖魚IFN-γrel的重組表達載體。

為實現上述目的，本發明采用以下技術措施: