[發(fā)明專利]一株能穩(wěn)定分泌抗芋螺毒素的單克隆抗體細(xì)胞株及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810247480.X
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108642017B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王榮智;鐘燕芳;楊航;王俊程;汪世華;凌素美
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/577
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

本發(fā)明屬于抗體工程領(lǐng)域，具體涉及一株能穩(wěn)定分泌抗芋螺毒素（ω?CTX MVIIA）的單克隆抗體細(xì)胞株及應(yīng)用。該雜交瘤細(xì)胞株2E5，已于2018年1月31日在中國普通微生物菌種保藏管理中心保藏，保藏編號是：CGMCC NO.15295。本發(fā)明以原核表達(dá)純化GST?ω?CTX MVIIA重組抗原為免疫抗原，TRX?ω?CTX MVIIA重組抗原為檢測抗原包被酶標(biāo)板。通過iELISA法篩選獲得一株陽性雜交瘤細(xì)胞，該雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體為建立ω?CTX MVIIA免疫檢測方法奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞工程領(lǐng)域，具體涉及一株能穩(wěn)定分泌抗芋螺毒素（ω-CTX MVIIA）單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株（IgG）及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

芋螺毒素（Conotoxin，CTX）是芋螺（Cone snails）分泌的用于捕食和防御的一種具有生物活性的小分子多肽類神經(jīng)毒素，一般含有10~30個氨基酸，大多富含二硫鍵，靶定神經(jīng)系統(tǒng)的離子通道和受體，人和動物被叮咬后一般會出現(xiàn)麻痹、抽搐、驚厥甚至死亡。ω-芋螺毒素MVIIA（ω-CTX MVIIA）含有25個氨基酸殘基，是特異與可逆的N-型電壓敏感性鈣離子通道的阻斷劑，可當(dāng)做鎮(zhèn)痛劑治療劇烈的和慢性的疼痛。是神經(jīng)生物學(xué)、藥物藥理學(xué)、多肽化學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域的研究熱點，因此對其檢測有重要意義。

目前芋螺毒素的檢測方法有高效液相色譜法(High performance liquidchromatography, HPLC)、電噴霧-四極桿-飛行時間質(zhì)譜法（Electrospray ionization/quadrupole time of flight mass spectrometry，ESI-Qq-TOF-MS）、銅螯合納米磁珠結(jié)合生物質(zhì)譜法（Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry，MALDI-TOF-MS）等。這些方法具有比較高的靈敏度，可以精確的分析樣品中毒素的含量，但是其設(shè)備昂貴、對樣品的純度要求高、操作復(fù)雜、需要經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員操作，因此不適合推廣。免疫分析法（immuno-analysis）是近十多年來發(fā)展起來的新方法，是將抗原抗體反應(yīng)與靈敏的檢測系統(tǒng)結(jié)合而成的一種分析方法，具有特異性好，靈敏度高，操作技術(shù)簡單，成本低，對樣品的純度要求不高等優(yōu)點，特別適合于大批量樣本的檢測，近年來被廣泛普及應(yīng)用于各種毒素的檢測。所以，近十幾年來用于生物毒素檢測的酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）方法得到迅速發(fā)展。

由于ω-CTX MVIIA是小分子多肽，具有抗原性但不具有免疫原性，直接免疫動物無法獲得相應(yīng)的抗體，因此較少看到ω-CTX MVIIA的免疫學(xué)檢測方法。只有基于多克隆抗體、單鏈抗體和單克隆抗體（IgM）的ω-CTX MVIIA免疫檢測方法，而未見基于單克隆抗體（IgG）的ω-CTX MVIIA免疫分析。因此，制備出能穩(wěn)定分泌抗ω-CTX MVIIA的單克隆抗體（IgG）雜交瘤細(xì)胞株，為商品化開發(fā)生產(chǎn)高質(zhì)量的酶聯(lián)檢測試劑盒奠定堅實的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一株能穩(wěn)定分泌抗ω-CTX MVIIA單克隆抗體（IgG）的雜交瘤細(xì)胞株。

本發(fā)明首先保護(hù)一株雜交瘤細(xì)胞株2E5，分類命名為抗芋螺毒素（ω-CTX MVIIA）單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，已于2018年1月31日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址為北京朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號是:CGMCC NO.15295。

其次保護(hù)一種由所述雜交瘤細(xì)胞株2E5產(chǎn)生的單克隆抗體（IgG）。

所述的單克隆抗體的制備方法，是將雜交瘤細(xì)胞株2E5，通過制備腹水和純化，獲得單克隆抗體（IgG）。

本發(fā)明還保護(hù)了所述雜交瘤細(xì)胞株2E5產(chǎn)生的單克隆抗體的應(yīng)用，是將雜交瘤細(xì)胞株2E5產(chǎn)生的單克隆抗體（IgG）用于檢測ω-CTX MVIIA。