[發(fā)明專利]一種PT試劑用于測定血漿內(nèi)FXa活性的用途在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810247416.1 | 申請日： | 2018-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN108508220A | 公開（公告）日： | 2018-09-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孫雙勇;郝春華;張蕊;王維亭;徐向偉;趙專友;蔣玲艷 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津藥物研究院新藥評價有限公司;南開大學(xué)泰達(dá)生物技術(shù)研究院 |
| 主分類號： | G01N33/86 | 分類號： | G01N33/86;G01N33/535 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 300301 天津市濱海*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 血漿 高效靈敏 活性測定 有效反應(yīng) 安全 | ||
1.一種PT試劑用于測定血漿內(nèi)FXa活性的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述PT試劑包括兔腦提取物、葡萄糖、白蛋白、山梨酸鉀和氯化鈣；
優(yōu)選地，所述兔腦提取物的質(zhì)量濃度為20-50mg/mL，優(yōu)選為30-45mg/mL；
優(yōu)選地，所述葡萄糖的質(zhì)量濃度為15-35mg/mL，優(yōu)選為20-30mg/mL；
優(yōu)選地，所述白蛋白的質(zhì)量濃度為80-120mg/L，優(yōu)選為90-110mg/L；
優(yōu)選地，所述山梨酸鉀的質(zhì)量濃度為450-550mg/L，優(yōu)選為480-520mg/L；
優(yōu)選地，所述氯化鈣的摩爾濃度為0.01-0.1mol/L，優(yōu)選為0.012-0.05mol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述PT試劑的質(zhì)量濃度為7.5-30％，優(yōu)選為10-25％。
4.一種測定血漿內(nèi)FXa活性的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)采集血樣，加入抗凝劑進(jìn)行抗凝，離心取血漿；
(2)向步驟(1)中的血漿中加入凝血酶抑制劑，再加入PT試劑，孵育；
(3)向孵育后的血漿中加入FXa發(fā)色底物，進(jìn)行檢測。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述抗凝劑為枸櫞酸鈉；
優(yōu)選地，所述抗凝劑的質(zhì)量濃度為2-8％，優(yōu)選為3-5％；
優(yōu)選地，所述抗凝劑與所述血樣的體積比為1:(5-15)，優(yōu)選為1:(8-12)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述離心的轉(zhuǎn)速為2000-5000rpm，優(yōu)選為2500-4000rpm；
優(yōu)選地，所述離心的時間為5-15min，優(yōu)選為8-12min。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述凝血酶抑制劑為水蛭素；
優(yōu)選地，所述凝血酶抑制劑的質(zhì)量濃度為0.5-3mg/mL，優(yōu)選為0.8-2mg/mL。
8.根據(jù)權(quán)利要求4-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述PT試劑的質(zhì)量濃度為7.5-30％，優(yōu)選為10-25％；
優(yōu)選地，所述孵育的溫度為20-40℃，優(yōu)選為25-37℃；
優(yōu)選地，所述孵育的時間為1-10min，優(yōu)選為3-8min；
優(yōu)選地，所述FXa發(fā)色底物為S-2765；
優(yōu)選地，所述FXa發(fā)色底物的摩爾濃度為300-500μM，優(yōu)選為350-450μM。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述檢測采用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測；
優(yōu)選地，所述檢測的波長為400-420nm；
優(yōu)選地，所述檢測具體包括如下步驟：從反應(yīng)起始開始，每隔1-3min測定吸光度，將得到的吸光度進(jìn)行線性擬合，計算FXa活性值。
10.根據(jù)權(quán)利要求4-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)采集血樣，加入與血樣體積比為1:(5-15)的質(zhì)量濃度為2-8％的抗凝劑進(jìn)行抗凝，2000-5000rpm離心5-15min取血漿；
(2)向步驟(1)中的血漿中加入水蛭素，再加入PT試劑，20-40℃孵育1-10min，其中，水蛭素的質(zhì)量濃度為0.5-3mg/mL，PT試劑的質(zhì)量濃度為7.5-30％；
(3)向孵育后的血漿中加入S-2765，所述S-2765的摩爾濃度為300-500μM，在波長為400-420nm進(jìn)行檢測，從反應(yīng)起始開始，每隔1-3min測定吸光度，將得到的吸光度進(jìn)行線性擬合，計算FXa活性值。
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