[發(fā)明專利]一種可視化檢測轉(zhuǎn)基因食品的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810246527.0
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108486233B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龐月紅;孫夢夢;沈曉芳
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種可視化檢測轉(zhuǎn)基因食品中轉(zhuǎn)基因含量的方法，其特征在于，所述方法，包括：

利用具有特異性識別功能的CaMV 35S特定核酸探針和與之互補的模板序列；當(dāng)食品樣品中特異性啟動子CaMV 35S存在時，可以與其序列互補的相應(yīng)模板結(jié)合形成環(huán)狀；環(huán)狀DNA同時包含了G-四鏈體的互補序列；經(jīng)過T4-DNA連接酶連接后，在Phi29聚合酶作用下引發(fā)滾環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所包含G-四鏈體；G-四鏈體與氧化血紅素Hemin形成的具有過氧化物酶催化活性的DNA人工模擬酶；DNA酶催化ABTS進(jìn)行顯色反應(yīng)；

提取不同比例轉(zhuǎn)基因食品樣品的基因組，結(jié)合模板序列引發(fā)滾環(huán)擴(kuò)增并將擴(kuò)增產(chǎn)物形成DNA酶催顯色反應(yīng)，建立紫外吸收強(qiáng)度與食品樣品中轉(zhuǎn)基因含量的回歸曲線方程；當(dāng)需要檢測未知食品樣品時，提取未知食品樣品基因組并在相同的條件下進(jìn)行反應(yīng)獲取紫外吸收強(qiáng)度，并將結(jié)果代入回歸曲線方程，即獲得未知樣品中轉(zhuǎn)基因含量；其中，含量的檢測范圍為0.1pmol/L-1000pmol/L；

所述T4-DNA連接酶連接中T4-DNA連接酶的濃度為250units/25μL；所述連接的反應(yīng)時間為40-70min；所述滾環(huán)擴(kuò)增中聚合酶的濃度20units/25μL；所述滾環(huán)擴(kuò)增的反應(yīng)時間為40-60min。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述模板序列，與CaMV 35S特定核酸探針兩端堿基序列完全互補配對，中間包含有一段與G-四聯(lián)體互補的特定核酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述模板序列如SEQ ID NO:1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的CaMV 35S特定核酸探針的序列如SEQ ID NO:2所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述顯色反應(yīng)的試劑是ABTS。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一所述的方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)基因食品為以下任意一種或者多種：大米、玉米、大豆、番茄，或者上述轉(zhuǎn)基因食品的附加產(chǎn)品。