[發明專利]高血壓基因多態性熒光PCR溶解曲線檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 201810245896.8
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN109457024A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發明（設計）人: 倪曉龍;李亞波;李春鳳;歐陽云
• 申請（專利權）人: 杭州泰領生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

本發明涉及一種高血壓基因多態性熒光PCR溶解曲線檢測試劑盒，及其應用，以及一種檢測高血壓用藥基因的多重PCR熔解曲線檢測方法。所述試劑盒主要包括引物組合、探針組合，以及熱啟動聚合酶、PCR反應緩沖液、dNTPs等PCR反應試劑，含高血壓用藥相關7種基因多態性檢測，分別是CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1(1165G>C)、AGTR1(1166A>C)、CYP3A5*3、NPPA(T2238C)、ACE(I/D)，通過3個反應液進行PCR擴增和熔解分析，判斷7個基因相關多態性的情況，從而指導臨床高血壓5大類藥物的個性化應用。本發明通過3個反應管輕松完成檢測過程，同時檢測過程無需核酸提取過程，簡化操作步驟，判讀方法簡單。

(一)技術領域

本發明涉及一種高血壓基因多態性熒光PCR溶解曲線檢測試劑盒，及其應用，以及一種檢測高血壓用藥基因的多重PCR熔解曲線檢測方法。

(二)背景技術

高血壓作為一種慢性非傳染性疾病，也是我國患病率較高、致殘率較高及疾病負擔較重的慢性疾病。2016年國家衛生計生委發布的數據顯示：我國18歲及以上成人高血壓患病率為25.2％。盡管近些年我國人群的高血壓知曉率、治療率、控制率已有改善，但仍處于較低水平。全球疾病負擔研究顯示：中國人群因高血壓造成的傷殘調整壽命年(DALY)高達3794萬人年，占總DALY的12.0％，占心血管病總DALY的 63.5％；其中傷殘損失壽命年(YLD)為3557萬人年，早逝損失壽命年(YLL)為236.5 萬人年，占心血管病YLD和YLL的50.1％和64.5％，是心血管病負擔的首位危險因素。全國每年因血壓升高所致的過早死亡人數高達200余萬，每年直接醫療費用達366 億，我國治療后的高血壓患者的血壓達標率為29.6％。高血壓作為心腦血管病最重要的危險因素，流行態勢嚴重，其主要并發癥如卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病等的致殘致死率高，嚴重消耗醫療和社會資源，給家庭和社會造成沉重負擔，已成為我國一項重要的公共衛生問題。盡管近年來高血壓的診斷和治療取得了長足進展，高血壓治療藥物也層出不窮，但高血壓藥物治療亦存在諸多不合理之處，由此也影響了患者治療的依從性、持續性及血壓控制率。

藥物反應的個體差異是臨床上目前血壓控制率低下的主要因素，產生這種差異的原因有很多，比如升高、基因、性別、體重、疾病狀況在內的多種因素可導致不同個體對于藥物的反應的差別，然而遺傳因素是其中最根本的因素，藥物的代謝、轉運、受體的基因多態性直接決定了其編碼的蛋白功能差異，從而是藥物代謝吸收產生差異，導致人血藥濃度的顯著不同。目前臨床上常用的5大類藥物及對應的主要基因多態性及功能影響如下所示(表1)：

表1：高血壓藥物相關基因型的臨床意義

以上所述的基因突變均有較大可能與高血壓藥物在不同個體中的反應相關，相同劑量的藥物在不同個體中產生明顯差異，有的個體有效，有的個體根本無效，甚至有的人產生藥物反應。因此，利用有效地基因多態性檢測技術對于高血壓患者進行基因檢測，根據檢測結果可以調整患者的用藥種類或劑量，可以使藥物發揮最佳作用，同時可以防止藥物的毒副作用。這為精準醫療中個體化醫療提供最佳的科學實踐論據，為迎接更廣泛的個體化醫療時代的來臨繼續努力。

目前針對基因多態性檢測的技術有很多，最常用的有聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性分析(PCR-RFLP法)、序列特異性PCR、一代測序、二代測序等技術，但是這些技術有各自的應用缺陷，有的操作繁瑣，檢測周期長，無法進行高通量多位點同時檢測，使得目前在臨床上對于多態性檢測技術應用仍不理想，一直無法滿足臨床檢測需求。