[發明專利]一種胎盤保存液及其制備方法

在審

• 申請號: 201810245711.3
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108684653A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發明（設計）人: 史軍
• 申請（專利權）人: 杭州聯澤生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京華際知識產權代理有限公司 11676
• 代理人: 楊覓

本發明涉及一種用于組織保存的組合物，更具體地說，是涉及一種胎盤保存液及其制備方法。其組成及配比為，1000ml水溶液中，磷酸二氫鉀204mg～340mg，磷酸氫二鈉1.40g～1.50g,氯化鈉7.6g～8.2g，氯化鉀149mg～261mg，青霉素100000U～1000000U，鏈霉素60mg～100mg，葡萄糖12.5g，右旋糖酐?40 5g，檸檬酸三鈉7.35g，維生素C352mg～528mg，溶液pH值為7.33～7.83。本發明胎盤保存液成分簡單、穩定、安全、無任何毒副作用，成本低廉。本發明胎盤保存液的制備步驟簡便，能在短時間內大量配制。

技術領域：

本發明涉及一種用于組織保存的組合物，更具體地說，是涉及一種胎盤保存液及其制備方法。

背景技術：

人類胎盤由羊膜、絨毛膜和基蛻膜構成。羊膜和絨毛膜來源于胎兒，不同區域的蛻膜則起源于母體。胎盤除在胎兒發育、營養支持和維持耐受中發揮重要作用外，同樣也是一個干細胞儲備庫。胎盤組織容易得到，易于處理，不需要侵入性操作，對其研究不會涉及倫理道德問題，因此目前已成為尋找人類干細胞新來源的研究熱點。

因為胎盤在離體情況下,活力在短時間內迅速下降，這直接影響了胎盤的質量。如何維持離體胎盤的活性成為了首要解決的問題。在此之前，人們在DMEM/F12等基礎培養基的基礎上添加青霉素、鏈霉素、人血白蛋白等物質用于保存離體胎盤。但是由于營養成分單一、抗生素種類過多且濃度大等原因，導致種子細胞在長期保存或運輸中出現活力低下、甚至死亡等現象。隨后，人們進一步改善保存液的組成體系，在無機離子構成的緩沖液的基礎上添加數種氨基酸和抗生素以維持離體胎盤細胞活性、降低染菌率。但保存液的成分復雜，配制過程繁瑣，不能便捷的應用。

發明內容：

本發明正是針對上述問題，提供了一種胎盤保存液及其制備方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案，其組成及配比為，1000ml水溶液中，磷酸二氫鉀204mg～340mg，氯化鈉7.6g～8.2g，氯化鉀149mg～261mg，青霉素100000U～1000000U，鏈霉素60mg～100mg，葡萄糖12.5g，右旋糖酐-40 5g，檸檬酸三鈉7.35g，維生素C352mg～528mg，溶液pH值為7.33～7.83。

制備步驟為，稱取12.5g葡萄糖粉末、7.35g檸檬酸三鈉、352mg～528mg維生素C，溶解于1LPBS緩沖溶液中，攪拌均勻形成混合溶液，再用0.22μm過濾篩過濾，即得最終溶液。

PBS緩沖溶液的制備方法為，將氯化鈉7.6g～8.2g，氯化鉀149mg～261mg，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)1.42g，磷酸二氫鉀204mg～340mg溶于水中，調pH至7.2～7.4，定容1L；然后高壓蒸汽滅菌，室溫保存。

本發明的有益效果：

本發明以磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉和氯化鉀相組合共同作用，作為緩沖劑，有效防止細胞酸化或堿化。在現有技術的基礎上進一步改進了保存液的離子緩沖體系和營養體系，同時優化制劑中的成分組成及其含量，起溶解保護試劑的作用。它是生物化學研究中使用最為廣泛的一種緩沖液。葡糖糖可為胎盤提供了可直接利用的營養物質，低分子右旋糖酐-40代血漿組分，可維持溶液的滲透壓，有助于提高胎盤中間充質干細胞的活率，使胎盤在長時間保存中可獲取各種所需的營養。檸檬酸三鈉主要用于止血學檢驗及血沉的測定。因其毒性小，也用于輸血保養液中。其抗凝機制是檸檬酸三鈉根離子與血中鈣離子生成難解離的可溶性絡合物枸櫞酸鈣，此絡合物易溶于水但不易解離，凝血過程受到抑制，從而阻止血液凝固，用于體外抗凝血。緩沖劑的作用是維持血漿恒定pH值，防止易變因子失活。維生素C作為一種還原劑和抗氧化劑，大大的提高了胎盤間充質干細胞的抵抗能力。在24h內仍能很好的維持胎盤間充質干細胞的活力。

本發明胎盤保存液成分簡單、穩定、安全、無任何毒副作用，成本低廉。本發明胎盤保存液的制備步驟簡便，能在短時間內大量配制。