[發(fā)明專利]一種微生物轉化法制備達木林B的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810243934.6 | 申請日： | 2018-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN108410940B | 公開（公告）日： | 2019-03-05 |
| 發(fā)明（設計）人： | 婁志春 | 申請（專利權）人： | 婁志春 |
| 主分類號： | C12P33/20 | 分類號： | C12P33/20;C12P33/02;C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 長沙新裕知識產(chǎn)權代理有限公司 43210 | 代理人： | 趙登高 |
| 地址： | 410009 湖南省長*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 短刺小克銀漢霉 絞股藍 菌株 皂苷 微生物轉化 轉化 脫水 選擇性制備 原料利用率 分離純化 種子制備 轉化產(chǎn)物 孢子 構型 羥基 發(fā)現(xiàn) | ||
1.一種微生物轉化法制備達木林B的方法，其特征在于，包括通過如下步驟：
步驟S1，孢子和種子制備：將短刺小克銀漢霉AS3.153菌株接種于斜面培養(yǎng)基上，置于28℃恒溫培養(yǎng)7d，得到菌絲生長旺盛、孢子豐富的培養(yǎng)物；取適量孢子接入種子瓶，于28℃振蕩培養(yǎng)24h，得到種子培養(yǎng)物；
步驟S2，微生物轉化：以5%的接種量將種子培養(yǎng)物轉至轉化瓶，28℃振蕩預培養(yǎng)24h后加入絞股藍皂苷L無菌水溶液，使絞股藍皂苷L終濃度為0.2g/L，28℃振蕩培養(yǎng)96h；
步驟S3，轉化產(chǎn)物收集：取轉化培養(yǎng)物上清液，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，濃縮得到轉化產(chǎn)物粗品；
步驟S4，將轉化產(chǎn)物粗品上樣于正相硅膠柱，硅膠徑高比為1:10，拌樣硅膠占硅膠總量的1/10，干法裝柱，拌硅膠上樣；依次用體積比為40:1:2、20:1:2的二氯甲烷/甲醇/丙酮混合溶劑以12BV/h的速度梯度洗脫，分別洗脫8BV、8BV；收集20:1:2二氯甲烷/甲醇/丙酮洗脫7-8BV的洗脫液濃縮干燥得到達木林B。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：斜面培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基，成分為：蔗糖1.5g，瓊脂2.0g，馬鈴薯20g和蒸餾水100ml。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：種子瓶和轉化瓶培養(yǎng)基成分為：葡萄糖2.0g，酵母膏0.5g，蛋白胨0.5g，氯化鈉0.5g，磷酸氫二鉀0.5g和蒸餾水100ml，pH調(diào)至8.3。
4.根據(jù)權利要求2或3所述的方法，其特征在于：培養(yǎng)基均于115℃滅菌30min后使用。
5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟S1中，短刺小克銀漢霉AS3.153菌株接種于斜面培養(yǎng)基之前于4℃保存。
6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟S1中，用無菌接種環(huán)取一環(huán)富含孢子的菌絲體，僅將孢子接入種子瓶中。
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