[發明專利]一種與辣椒成熟果顏色基因相關的插入/缺失位點、分子標記、分子標記引物和應用

在審

• 申請號: 201810243771.1
• 申請日: 2018-03-23
• 公開（公告）號: CN108384875A
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發明（設計）人: 歐立軍;劉宇華;鄒學校;呂俊恒;馬艷青;張竹青;陳文超;戴雄澤
• 申請（專利權）人: 湖南省蔬菜研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 湖南天地人律師事務所 43221
• 代理人: 陳旭云

1.一種與辣椒成熟果果實顏色緊密相關的插入/缺失位點，其特征在于所述的插入/缺失位點為從辣椒LOC107875664基因編碼區(ATG開始)上游3277bp開始至編碼區一段4513bp插入/缺失。

2.一種與辣椒成熟果果實顏色緊密相關的分子標記擴增引物，其特征在于所述分子標記擴增引物是針對權利要求1所述的與辣椒成熟果果實顏色緊密相關的插入/缺失位點設計的引物。

3.根據權利要求2所述的與辣椒成熟果果實顏色緊密相關分子標記擴增引物，其特征在于，所述的分子標記擴增引物為以辣椒LOC107875664基因缺失上游部分序列(包含部分缺失序列)和缺失下游部分序列(包含部分缺失序列)設計的檢測該缺失位點的兩對引物。

4.根據權利要求3所述的與辣椒成熟果果實顏色緊密相關的分子標記擴增引物，所述的分子標記擴增引物序列為：缺失上游HS5標記：HS5-F(SEQ ID NO.1)：GCAAGTATAGCTAATACCAACATTAC，HS5-R(SEQ ID NO.2)：AGTTCCTCAAGTGGTTAGCC。缺失下游HS6標記HS6-F(SEQ ID NO.3)：GTGAGTCGGCCTATGTTATCG，HS6-R(SEQ ID NO.4)：GTTTGAACAACGATGACAATGTG。

5.一種與辣椒果實顏色基因連鎖的分子標記HS5,HS6，其特征在于，利用權利要求4所述的分子標記擴增引物，HS5擴增出的PCR產物片段大小為500bp，核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，分子標記HS6擴增出的PCR產物片段大小為714bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

6.如權利要求1所述的與辣椒成熟果果實顏色緊密相關插入/缺失位點在鑒定或輔助篩選辣椒果實的顏色或辣椒果實育種中的應用。

7.如權利要求2-4任一所述的與辣椒成熟果果實顏色緊密相關的分子標記擴增引物在鑒定或輔助篩選辣椒果實的顏色或辣椒果實育種中的應用。

8.如權利要求5所述的與辣椒果實顏色基因連鎖的分子標記HS5,HS6在鑒定或輔助篩選辣椒果實的顏色或辣椒果實育種中的應用。

9.一種鑒定和篩選辣椒果實顏色的方法，具體步驟如下：

(1)以待測樣品基因組DNA為模板，利用權利要求5所述的分子標記HS5,HS6擴增引物進行PCR擴增，獲得擴增產物；

(2)將擴增產物經過瓊脂糖凝膠電泳分離；

(3)結果分析，若瓊脂糖凝膠上出現500bp(SEQ ID NO.5)和714bp(SEQ ID NO.6)兩條特異性條帶，則判定為成熟果果實顏色為紅色的材料，若僅出現一條602bp(SEQ ID NO.7)帶，則判定為成熟果果實顏色為黃色的材料。

10.如權利要求9所述的鑒定和篩選辣椒果實顏色的方法，其特征在于所述鑒定和篩選辣椒果實顏色的方法步驟(1)中，PCR擴增程序為95.0℃預變性3min；95.0℃變性30s，55.0℃復性30s，72.0℃延伸45s，32個循環；72.0℃延伸5min，8℃保存。