[發明專利]一種生殖器官及腺毛組織特異啟動子GhS及其應用

有效

• 申請號: 201810242016.1
• 申請日: 2018-03-22
• 公開（公告）號: CN108277224B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 左開井;孫文杰;高正銀;陳云
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 莊文莉

1.一種啟動子GhS，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一組用于擴增根據權利要求1所述啟動子GhS的外側引物對，其特征在于，所述外側引物對的序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。

3.一組用于擴增根據權利要求1所述啟動子GhS的內側引物對，其特征在于，所述內側引物對的序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。

4.一種重組載體，其特征在于，包含根據權利要求1所述的啟動子GhS。

5.一種根據權利要求1所述的啟動子GhS的用途，所述用途具體為啟動子GhS在驅動植物中目的基因在特定組織中表達的應用；所述植物包括棉花、擬南芥；所述組織包括生殖器官、纖維。

6.一種根據權利要求1所述的啟動子GhS的制備方法，其特征在于，利用生物克隆法或人工合成法進行制備。

7.根據權利要求6所述的啟動子GhS的制備方法，其特征在于，所述生物克隆法具體包括以下步驟：

步驟1、提取棉花基因組DNA；

步驟2、以所述DNA為模板，依次用權利要求2所述的外側引物、權利要求3所述的內側引物進行擴增；

步驟3、將所述擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，即得啟動子GhS。

8.根據權利要求6所述的啟動子GhS的制備方法，其特征在于，所述人工合成法具體包括以下步驟：

步驟1、根據啟動子GhS的正鏈和負鏈序列，分別合成出長度150～200bp、具有粘性末端的單鏈寡核苷酸正鏈片段和單鏈寡核苷酸副鏈片段；

步驟2、將所述單鏈寡核苷酸正鏈片段和單鏈寡核苷酸副鏈片段分別退火，形成帶有粘性末端的雙鏈寡核苷酸片段；

步驟3、混合所述雙鏈寡核苷酸片段，經T4 DNA連接酶催化組裝成一個完整的啟動子GhS。