[發明專利]一種體外培養腦腫瘤細胞的培養液及培養方法

有效

• 申請號: 201810238925.8
• 申請日: 2018-03-22
• 公開（公告）號: CN110295145B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 楊增杰;程艷;梁玉剛
• 申請（專利權）人: 蘇州麥迪耐斯醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01N1/02
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 汪青;周敏

1.一種體外培養腦腫瘤細胞的培養液，其特征在于：所述的培養液包括神經細胞基礎培養基、添加質量為所述的神經細胞基礎培養基質量的0.5%~5%的B27營養因子、添加質量為所述的神經細胞基礎培養基質量的0.5%~5%的雙抗-青霉素/鏈霉素、添加質量為所述的神經細胞基礎培養基質量的0.5%~5%的谷氨酰胺、添加質量為所述的神經細胞基礎培養基質量的0.5%~5%的丙酮酸鈉、添加質量為所述的神經細胞基礎培養基質量的0.5%~1.5%的胎牛血清、重組Shh蛋白；其中，所述的重組Shh蛋白的添加量為每1 mL所述的神經細胞基礎培養基加入2.5 μ g~3.5 μg。

2.根據權利要求1所述的體外培養腦腫瘤細胞的培養液，其特征在于：所述的重組Shh蛋白的添加量為每1 mL所述的神經細胞基礎培養基加入2.8μg~3.2μg。

3.根據權利要求1所述的體外培養腦腫瘤細胞的培養液，其特征在于：所述的胎牛血清的添加質量為所述的神經細胞基礎培養基質量的0.8%~1.2%。

4.一種如權利要求1至3中任一項所述的培養液在腦腫瘤細胞的體外培養中的應用；所述的腦腫瘤細胞為髓母細胞瘤細胞。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的體外培養的方法為懸浮培養。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的腦腫瘤細胞在所述的培養液中的細胞接種密度為3×10⁵~5×10⁵個/mL。

7.一種腦腫瘤細胞的體外培養方法，其特征在于：將處理后的腦腫瘤細胞接種至權利要求1至3中任一項所述的培養液中進行懸浮培養；所述的腦腫瘤細胞為髓母細胞瘤細胞。

8.根據權利要求7所述的腦腫瘤細胞的體外培養方法，其特征在于：所述的處理后的腦腫瘤細胞的制備方法為：將從小鼠小腦中提取的髓母細胞瘤組織在36℃~38℃下采用消化液消化20~40min，然后用胰酶抑制劑終止消化，然后經濾膜過濾，離心后獲得所述的處理后的腦腫瘤細胞,其中，每10mL所述的消化液中的成分如下：90U~110U的木瓜蛋白酶、1mg~3mg的半胱氨酸以及2400U~2600 U的DNA酶。