[發明專利]一種AaWBC1基因啟動子及其功能驗證方法和應用

有效

• 申請號: 201810238751.5
• 申請日: 2018-03-22
• 公開（公告）號: CN108441495B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 唐克軒;王宇婷;付雪晴;謝利輝;沈乾;趙靜雅;孫小芬
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;C12Q1/6895;A01H5/00;A01H6/14
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種AaWBC1基因啟動子，其特征在于，所述AaWBC1基因啟動子的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的AaWBC1基因啟動子，其特征在于，所述AaWBC1基因啟動子能調控AaWBC1基因在青蒿分泌型腺毛中特異性表達。

3.如權利要求1所述的AaWBC1基因啟動子，其特征在于，所述啟動子為特異性啟動子，能夠代替組成型啟動子引導外源基因在植物青蒿分泌型腺毛中特異表達。

4.如權利要求1所述的AaWBC1基因啟動子，其特征在于，所述AaWBC1基因啟動子為誘導型啟動子。

5.一種如權利要求1所述的AaWBC1基因啟動子的功能驗證方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、培養青蒿無菌苗；

步驟二、根據青蒿全基因組中AaWBC1基因啟動子序列，克隆啟動子序列；

步驟三、分析調控基因在分泌型腺毛中表達的啟動子上面的順式作用元件，確定所述啟動子類型；

步驟四、將克隆到的所述啟動子通過酶切連接連入pCAMBIA1391z載體中；

步驟五、將步驟四中構建好的所述載體轉化根癌農桿菌；

步驟六、將步驟五中帶有載體的根癌農桿菌穩定轉化青蒿；

步驟七、PCR檢測轉基因植株；

步驟八、確定所述啟動子所引導的GUS報告基因在植株中表達部位。

6.如權利要求5所述的AaWBC1基因啟動子的功能驗證方法，其特征在于，所述步驟二為以基因組DNA為模板，采用兩輪巢式PCR方法擴增分泌型腺毛特異性AaWBC1啟動子序列。

7.如權利要求5所述的AaWBC1基因啟動子的功能驗證方法，其特征在于，所述步驟四中，為構建pCAMBIA1391z載體，正向引物中引入BamHI酶切位點，反向引物中引入NcoI酶切位點；引物序列如下所示：

BamHI-Pro-WBC1-FP：

CAGGTCGACGGATCCATGTGGGTGTTTTTGAAAGAC

Pro-WBC1-NcoI-RP：

TCAGATCTACCATGGTTTTACTTATCAATGAAAACCTAG。

8.如權利要求5所述的AaWBC1基因啟動子的功能驗證方法，其特征在于，所述步驟六具體包括：

1)外植體的預培養；

2)農桿菌與外植體的共培養；

3)抗性再生植株的篩選。

9.一種利用如權利要求1所述的AaWBC1基因啟動子在調控外源基因在青蒿分泌型腺毛組織中特異性表達及其在青蒿基因工程育種中的應用。