[發明專利]共表達H5亞型禽流感HA蛋白和傳染性法氏囊VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒疫苗株

在審

• 申請號: 201810238416.5
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108543067A
• 公開（公告）日: 2018-09-18
• 發明（設計）人: 陳化蘭;陳普成;姜永萍;柳金雄;鄧國華;曾顯營;高立
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心)
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61P31/14;A61K39/145;A61P31/16;A61K39/245;A61P31/22;C12N15/85;C12N7/01;C12R1/93
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 陳曉娜

本發明涉及一種共表達H5亞型禽流感HA基因和傳染性法氏囊VP2基因的重組火雞皰疹病毒疫苗株及其應用。所述共表達H5亞型禽流感HA基因和傳染性法氏囊VP2基因的重組火雞皰疹病毒疫苗株的保藏號為CCTCC NO：V201738。本發明還提供一種用于預防禽流感病毒、傳染性法氏囊病毒和馬立克病毒的三聯疫苗，其包含有效量的所述共表達H5亞型禽流感HA基因和傳染性法氏囊VP2基因的重組火雞皰疹病毒疫苗株。

本申請要求2017年12月25日提交的發明專利申請201711428339.1的優先權。

技術領域

本發明涉及重組病毒疫苗，具體地，涉及一種共表達H5亞型禽流感HA蛋白和傳染性法氏囊VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒疫苗株及其應用。

背景技術

禽流感病毒(Avain influenza virus，AIV)和傳染性法氏囊病毒(Infectiousbursa disease virus，IBDV)是危害我國養禽業發展的兩種重要病毒性傳染病，給養禽業造成嚴重的經濟損失^[1]。目前，控制這兩種傳染性疾病的主要手段為疫苗的免疫接種。傳統的疫苗雖然能夠給家禽提供有效的保護，但同時也存在著很多的不足，如禽流感滅活疫苗的缺點是免疫原性差、副作用較多、使用劑量大^[2]；而傳染性法氏囊病疫苗的缺點主要包括：弱毒活疫苗易受母源抗體的干擾；中等毒力活疫苗對法氏囊有損傷，同時還具有擴散病毒的危險；滅活疫苗不能夠誘導機體產生堅強的免疫力，不能抵抗強毒株的攻擊等^[3]。為了解決這些問題，近年來安全有效的重組病毒活載體疫苗成為研究的熱點，如重組火雞皰疹病毒(rHVT)疫苗等，這些疫苗具有更安全、能夠在機體內持續存在、能夠不受母源抗體的干擾、易于保存和運輸等特點，從而彌補了傳統疫苗的不足^[4-5]。

發明內容

本發明構建了一株同時表達禽流感病毒(AIV)HA蛋白和傳染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒(rHVT)。其目的是為研制禽流感病毒(AIV)-傳染性法氏囊病毒(IBDV)-馬立克病毒(MDV)三聯苗提供方法。

本發明以實驗室構建的連續覆蓋火雞皰疹病毒(HVT)全基因組的5個重組粘粒(pFosA、pFosB、pFosC、pFosD和pFosE)(可參見申請號201410171477.6)為基礎，首先在pFosE粘粒上利用轉座子(Kan2-egfp)尋找另外一個外源基因的插入位點，然后分別將禽流感病毒的HA蛋白的編碼核苷酸序列(SEQ ID NO.1)和傳染性法氏囊病毒的VP2蛋白的編碼核苷酸序列(SEQ ID NO.2)克隆至pCI(購自Promega)和pCAGGs^[6]載體中，獲得pCI-HA和pCAGG-VP2克隆。利用Gateway LR克隆技術，將pCI-HA的表達框CMV-HA-polyA插入到pFosC上HVT第053和054基因之間，把pCAGG-VP2的表達框Pec-VP2-polyA插入到pFosE上的HVT第088和第089基因之間，從而獲得了共表達HA蛋白和VP2蛋白的rHVT53-HA/88-VP2。通過細胞實驗和免疫效力來評估重組病毒rHVT-53-HA/88-VP2。該重組病毒rHVT-53-HA/88-VP2共表達H5亞型禽流感HA基因和傳染性法氏囊VP2基因的重組火雞皰疹病毒疫苗株，已于2017年9月30日保藏于中國典型培養物保藏中心(地址：中國武漢，武漢大學，郵編：430072)，保藏號為CCTCC NO：V201738。

因此，本發明提供下述技術方案：

1.一種構建共表達H5亞型禽流感HA蛋白和傳染性法氏囊VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒疫苗株的方法，所述方法包括將禽流感病毒的HA蛋白的編碼核苷酸序列插入在粘粒pFosC中，將傳染性法氏囊病毒的VP2蛋白的編碼核苷酸序列插入在粘粒pFosE上，將上述兩個重組粘粒與pFosA、pFosB和pFosD一起共轉染次代雞胚成纖維細胞CEF救獲共表達H5亞型禽流感HA蛋白和傳染性法氏囊VP2蛋白的重組火雞皰疹病毒疫苗株。