[發(fā)明專(zhuān)利]一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810236448.1
• 申請(qǐng)日: 2018-03-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108484553B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 占紀(jì)勛;張煒
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州唯鉑萊生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07D309/10
• 分類(lèi)號(hào): C07D309/10;C07D309/32;C12N15/76;C12N15/90;C12N15/54;C12P17/06;A61P31/04;A61P31/10;A61P31/12;A61P35/00;C12R1/465
• 代理公司: 杭州裕陽(yáng)聯(lián)合專(zhuān)利代理有限公司 33289
• 代理人: 姚宇吉

1.一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，

包括如下步驟：

步驟一，通過(guò)同源重組的方式，將SchS10糖基轉(zhuǎn)移酶基因進(jìn)行失活處理；

所述SchS10為合成Sch47554和Sch47555過(guò)程中使用的糖基轉(zhuǎn)移酶基因，

所述Sch47554和Sch47555是由鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136或ATCC 55186產(chǎn)生的抗生物；

步驟二，使用干擾質(zhì)粒進(jìn)行抗性篩選，形成鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株；

步驟三，對(duì)鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟四，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行破碎處理，再用提取劑對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行提取，真空干燥得到提取物；

步驟五，對(duì)提取物進(jìn)行初步分離，初步分離的各部分再進(jìn)一步用高效液相色譜法進(jìn)行分離，得到OZK1和OZK2化合物；

OZK1化合物的結(jié)構(gòu)式為：

OZK2化合物的結(jié)構(gòu)式為：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，

包括如下步驟：

步驟一，通過(guò)同源重組的方式，將SchS10糖基轉(zhuǎn)移酶基因進(jìn)行失活處理；

所述SchS10為合成Sch47554和Sch47555過(guò)程中使用的糖基轉(zhuǎn)移酶基因，

所述Sch47554和Sch47555是由鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136或ATCC 55186產(chǎn)生的抗生物；

步驟二，對(duì)成功被失活的SchS10糖基轉(zhuǎn)移酶基因使用干擾質(zhì)粒進(jìn)行抗性篩選，形成鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株；

步驟三，對(duì)鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟四，提取鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株的培養(yǎng)物中的各類(lèi)基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，采用的引物如下所示：

步驟五，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行破碎處理，再用提取劑對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行提取，真空干燥得到提取物；

步驟六，對(duì)提取物進(jìn)行初步分離，初步分離的各部分再進(jìn)一步用高效液相色譜法進(jìn)行分離，得到OZK1和OZK2化合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟四中的基因提取采用真菌/細(xì)菌DNA微量提取試劑盒。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟二中的干擾質(zhì)粒為pRY10，所述pRY10攜帶有抗阿伯拉霉素基因；所述pRY10干擾質(zhì)粒的制備過(guò)程為：aac為抗阿伯拉霉素基因，將目標(biāo)片段schS10插入到原質(zhì)粒的表達(dá)啟動(dòng)區(qū)域lacZ的插入位點(diǎn)之間，插入位點(diǎn)為HindIII和XbaI。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，步驟三，對(duì)鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株進(jìn)行培養(yǎng)；具體培養(yǎng)過(guò)程為：將鏈霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株在YM平板上進(jìn)行培養(yǎng)，添加阿伯拉霉素，28℃，10天；再將鏈霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10在YM平板上培養(yǎng)5天。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，所述步驟四中的提取劑的質(zhì)量百分比的組份為：89％乙酸乙酯、10％甲醇，1％乙酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，步驟五中的初步分離采用的方法為：使用硅膠柱在不同比例的氯仿/甲醇溶液處理下進(jìn)行分離。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，將UMW6經(jīng)過(guò)拜耳-維立格氧化反應(yīng)得到SHUNT

步驟二，將SHUNT經(jīng)過(guò)還原反應(yīng)得到

步驟三，將步驟二得到的產(chǎn)物在酸性環(huán)境下經(jīng)過(guò)質(zhì)子化作用得到

步驟四，將步驟三得到的產(chǎn)物經(jīng)過(guò)6-還原，5、6-脫水，12-氧化，得到

步驟五，將步驟四得到的產(chǎn)物經(jīng)過(guò)SchS7糖基轉(zhuǎn)移酶將通過(guò)糖基化作用連接至其結(jié)構(gòu)上，得到3'-Deoxyaquayamycin

步驟六，將步驟五得到的產(chǎn)物經(jīng)過(guò)SchS9糖基轉(zhuǎn)移酶將或通過(guò)糖基化作用連接至其結(jié)構(gòu)上，得到：OZK1和OZK2