[發明專利]一種用于鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹的方法

有效

• 申請號: 201810235934.1
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108251542B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 陳夏月;李榮華;王春琳;母昌考;宋微微;葉央芳;劉磊;史策
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種用于鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹的方法，是提取待檢測的青蟹樣品的核酸樣品，然后用PCR引物對擴增核酸樣品進行基因分型；其中擬穴青蟹中對應的核苷酸片段的序列為SEQ ID NO:1：鋸緣青蟹中對應的核苷酸片段的序列為SEQ ID NO:2。本發明所建立的方法能夠有效的鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹，其通過高分辨率熔融曲線HRM對待檢測的青蟹進行分型，從而快速、準確鑒別青蟹種質，為青蟹的育苗養殖提供技術支持。

技術領域

本發明屬于分子標記輔助遺傳育種技術領域，具體涉及一種用于鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹的方法。

背景技術

青蟹屬(Scylla)隸屬于甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapode)、短尾亞目(Brachyura)、梭子蟹科(Portunidae)。廣泛分布于印度一西太平洋沿岸水域，包括東南亞、澳大利亞、日本、印度、南非等海域的紅樹林地區及河口內灣區，在我國主要分布于浙江、福建、臺灣、廣東、廣西和海南沿岸水域。青蟹具有個體大、生長快、適應性強、肉味鮮美、營養豐富等特點，已成為世界性的經濟養殖品種，但是隨著捕撈強度的加大，海洋環境的污染，野生青蟹資源嚴重衰退，根據陳丕茂等人在2002-2004年各礁區拖網調查,蟹類資源密度為180.985kg·km^-2,但經濟蟹類所占比例僅為26.69％，且在以往調查中出現率較高且經濟價值較高的鋸緣青蟹未捕到，因此青蟹的人工養殖迫在眉睫。擬穴青蟹和鋸緣青蟹是我們國家常見青蟹種類，由于不同青蟹在養殖生態學、繁殖學、營養學等生理生態方面有較大差異，不同種青蟹育苗要求不同，開展青蟹屬種類的鑒定研究有助于青蟹養殖技術的發展。

發明內容

本發明提供一種用于鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹的方法，以及該方法所使用的分子標記；通過本發明的方法能夠有效的鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹，從而彌補現有技術的不足。

本發明的用于鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹的方法，是提取待檢測的青蟹樣品的核酸樣品，然后用PCR引物對擴增核酸樣品進行基因分型；

其中擬穴青蟹(Scylla paramamosain)中對應的核苷酸片段的序列為SEQ ID NO:1：

AATTAAAAAACTAATGATTATGCTACCTTTGCACGGTCAAAATACCGCGGCTATTTAACA-TTTTTGTCAGTGAGCAGGCTAGACTATA；

鋸緣青蟹(Scylla_serrata)中對應的核苷酸片段的序列為SEQ ID NO:2：

AATTAAAAAACTAATGATTATGCTACCTTTGCACGGTCAAAATACCGCGGCTATTTAACACTTTTTGTCAGTGAGCAGGCTAGACTATA；

其中所使用的引物對，能夠同時擴增上述核苷酸序列為SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2的基因片段；

作為實施例的一種具體記載，所述的引物對的上游引物的序列如下：

5′-AATTAAAAAACTAATGATTATGCTACC-3′(SEQ ID NO:3)

下游引物的序列如下：

5′-TATAGTCTAGCCTGCTCACTGACA-3′(SEQ ID NO:4)；

上述的基因分析是使用高分辨率熔解曲線方法，其中反應程序如下：95℃預變性10min，95℃變性30s，Tm退火30s，72℃30s，45個循環。

本發明所建立的方法能夠有效的鑒別擬穴青蟹和鋸緣青蟹，其通過高分辨率熔融曲線HRM對待檢測的青蟹進行分型，從而快速、準確鑒別青蟹種質，為青蟹的育苗養殖提供技術支持。

附圖說明

圖1：擬穴青蟹和鋸緣青蟹的外部形態圖；