[發明專利]穩定表達全豬源抗PEDV中和抗體PC10-IgA的CHO細胞系及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201810235163.6
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108359641B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 劉平黃;符芳;馮力;孟慶文;薛美
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心）
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K16/10;A61K39/42;A61P31/14;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

本發明公開了一株穩定表達全豬源抗豬流行性腹瀉病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)中和抗體PC10?IgA的CHO細胞系及其構建方法和應用。所述的細胞系命名為PC10?IgA?CHO，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其菌種保藏編號為：CGMCC No.15293。此外，本發明還提出了一種由所述的CHO細胞系分泌產生的全豬源抗豬流行性腹瀉病毒的PC10?IgA中和抗體，該中和抗體具有中和PEDV病毒的能力，同時可以與感染Vero?E6細胞的病毒蛋白結合，具有抗PEDV的生物學活性和功能。通過對該細胞系進行培養，可獲得大量的具有抗PEDV作用的PC10?IgA中和抗體，因此，本發明的提出使治療性抗PEDV IgA抗體大量的獲得和使用成為了可能，為PEDV的預防和治療提供了新的技術手段。

技術領域

本發明涉及一株穩定表達抗PEDV中和抗體的CHO細胞系及其構建方法和應用，特別涉及一株穩定表達全豬源抗PEDV中和抗體PC10-IgA的CHO細胞系及其構建方法和應用。本發明屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

豬流行性腹瀉病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)是引起仔豬腹瀉的主要病原之一，以水樣腹瀉、仔豬高發病率和高死亡率為主要特征，每年給我國養殖業造成重大經濟損失。疫苗接種是預防PEDV腹瀉發病的主要手段。但是，由于PEDV變異毒株不斷出現等原因，常常導致傳統的疫苗不能完全保護而免疫效果欠佳，因此，豬基因工程單克隆抗體治療性制劑作為安全高效防控(治)產品成為家畜腹瀉性疾病防治的重要補充。

PEDV經消化道感染豬，主要感染小腸上皮細胞，局部腸道黏膜免疫在抗PEDV 感染中發揮了重要作用，特別是PEDV特異性的IgA。由于PEDV主要造成新生仔豬的大量死亡，而新生仔豬免疫系統發育不完全，一旦發病，主動免疫接種來不及，開發有效的豬源IgA PEDV治療性抗體等防治制劑對減少養豬業經濟損失非常重要。

CHO細胞表達系統因其分泌內源性蛋白少，翻譯后能夠進行糖基化修飾和表達量高成為當今治療性抗體主要生產系統。豬流行腹瀉病毒是引起仔豬腹瀉的主要病原，每年給我國養殖業造成巨大的經濟損失。機體抵抗PEDV感染主要通過產生保護性抗體，特別是黏膜免疫的IgA抗體。而豬IgA的生產和純化不容易建立。至今還沒有穩定表達豬源抗PEDVIgA抗體和特異性親和層析純化豬IgA方法的報道。

本發明篩選獲得了一株穩定表達全豬源抗PEDV中和抗體PC10-IgA的CHO細胞系，該細胞系能夠持續分泌表達全豬源的PC10-IgA抗體，表達的抗體PC10-IgA 具有結合PEDV病毒蛋白和抗PEDV的中和活性，本發明的提出為進一步研發全豬源的PC10-IgA抗體制劑提供了技術手段。

發明內容

本發明的目的在于提供一株穩定表達全豬源抗PEDV中和抗體PC10-IgA的 CHO細胞系及其構建方法和應用。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明利用前期分離到一株豬源抗PEDV的PC10單克隆抗體，通過體外構建 PC10-IgA重鏈和輕鏈表達質粒，通過共轉重鏈和輕鏈至CHO細胞，利用單個細胞流式分選和G418加壓篩選，獲得一株穩定表達全豬源抗PEDV中和抗體PC10-IgA 的CHO細胞系。該細胞上清分泌表達的PC10-IgA抗體具有中和PEDV病毒的能力，同時可以與感染Vero-E6細胞的病毒蛋白結合，因此具有生物學活性和抗PEDV功能。

所述的一株穩定表達全豬源抗PEDV中和抗體PC10-IgA的CHO細胞系，命名為PC10-IgA-CHO，分類命名為穩定表達全豬源抗豬流行性腹瀉病毒(PEDV)中和抗體PC10-IgA的CHO細胞系，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，其菌種保藏編號為：CGMCC No.15293，保藏日期為2018年1月29日。