[發明專利]一種用于鑒定人體液的組織來源的miRNAs復合擴增體系及其專用引物組合

有效

• 申請號: 201810234902.X
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108330198B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 季安全;孫啟凡;莫曉婷;胡勝;王樂
• 申請（專利權）人: 公安部物證鑒定中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種用于鑒定人體液的組織來源的miRNAs復合擴增體系及其專用引物組合。該引物組合包括引物組合甲和引物組合乙：引物組合甲由16個引物組成，核苷酸序列依次如序列21至序列28和序列31至序列38所示；引物組合乙由8個引物組成，核苷酸序列依次如序列11、序列12、序列13、序列14、序列16、序列17、序列18或序列19所示。采用本發明提供的miRNAs復合擴增體系可以有效的鑒定人體液的組織來源，大大簡化了鑒定刑偵現場體液或其斑跡的組織來源的步驟，能為明確案件性質、確定犯罪嫌疑人以及定罪量刑等提供準確的科學依據。本發明具有重大應用價值。

技術領域

本發明涉及法醫學技術領域，具體涉及一種用于鑒定人體液的組織來源的miRNAs復合擴增體系及其專用引物組合。

背景技術

人體液(如靜脈血、精液、月經血、陰道分泌物、唾液、尿液和汗液等)是法醫鑒定各類案件中涉及較多的生物檢材，鑒定人體液的組織來源可為刑事偵查提供有力的證據。傳統的鑒定體液的組織來源主要是基于酶促反應和免疫學檢測，這種方法由于種屬或組織特異性的限制，大部分實驗均為假定實驗和確證實驗。此外，對于陰道分泌物、月經血及汗液的鑒定都是不確定的。隨著分子生物學領域的不斷發展，越來越多的基于分子領域的檢測技術被用于鑒定體液的組織來源。大量mRNA標記被成功用于靜脈血、唾液、精液、陰道分泌物、尿液及汗液的組織來源的鑒定。Xu等(Xu Y，Xie J，Cao Y，et al.Development ofhighly sensitive and specific mRNA multiplex system(XCYR1)for forensic humanbody fluids and tissues identificantion[J].PLoS One，2014，9：e100123.)建立了針對靜脈血、尿液、汗液等10種體液，由16個mRNA位點組成的復合體系進行體液鑒定。宋鳳(宋鳳.法醫學體液斑鑒定的RNA標記研究[D].四川：四川大學，2016.)通過逆轉錄-終點法PCR建立的19個mRNA位點的熒光復合體系在靜脈血、精液、唾液、陰道分泌物及月經血五種體液樣本中均獲得了檢測結果。

然而，mRNA受濕度、紫外光、溫度及環境影響易降解的特點限制了其在法醫學體液來源鑒定領域的應用范圍。miRNA是一類廣泛存在于真核細胞中約由18-24個核酸組成的內源性非編碼小分子RNA，在多數生物進程中扮演十分重要的調節作用，其具有組織特異性、分子小、拷貝數高且不易降解的特點，即使在極端溫度、強酸、強堿條件下其含量和分子結構均無明顯變化，滿足檢測降解檢材的需求，成為繼mRNA之后的用于解決法醫學關注的熱點；但其拷貝數高、分子量小的特點，使得其檢測難度較大。

目前，基于miRNAs進行的體液鑒定研究主要運用熒光定量PCR技術(qPCR)檢測miRNAs在各體液中的表達差異，并借助統計學方法對結果進行分析。受到檢測方法的局限，qPCR需針對每個目標基因進行逆轉錄或擴增反應。這不僅會消耗大量的檢材和試劑，而且會加劇在反應過程中的可能性，對于結果判定造成混淆。熒光毛細管電泳可通過一個反應對多種體液的多個miRNA進行擴增和檢測，從而用于體液鑒定。Vander Meer等(VANDERMEER D，UCHIMOTO M L，WILLIAMS G.Simultaneous Analysis of Micro-RNA and DNA forDetermining the Body Fluid Origin of DNA Profiles[J].Journal of ForensicSciences，2013，58(4):967-971.)和Li等(LI Y，ZHANG J，WEI W，et al.A strategy forco-analysis of microRNAs and DNA[J].Forensic Science International：Genetics，2014，12:24-29.)研究了可同時獲取DNA分型結果和體液鑒定結果的DNA和miRNA共提取分析方法，且在全部檢測樣本中，均得到完整的DNA分型結果和miRNA標記的特征峰。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何鑒定人體液的組織來源。