[發明專利]一種內生真菌促進刺五加種子發芽的方法

有效

• 申請號: 201810234214.3
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108419475B
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發明（設計）人: 郭盛磊;沈宏偉;王謙博;付士朋;王振月
• 申請（專利權）人: 黑龍江中醫藥大學
• 主分類號: A01C1/00
• 分類號: A01C1/00;A01C1/02;A01C1/08
• 代理公司: 北京辰權知識產權代理有限公司 11619
• 代理人: 郝雅娟

1.一種內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于對刺五加種子進行內生真菌Alternaria alternata浸種處理和變溫層積處理，包括以下步驟：

(1)種子的獲取：采集刺五加黑紫色的成熟果實，放入容器中，加入少量水，等待果實軟化后，平鋪在地表進行踏踩，使種肉分離，再放入容器中加水多次進行淘洗，倒出果肉以及癟粒的種子，撈出容器底部的刺五加種子曬干待用；

(2)種子消毒：將刺五加種子用次氯酸鈉水溶液浸種消毒后，用清水沖洗凈，再用清水浸泡24h，使種子吸水飽和，取出后瀝干水分，所述次氯酸鈉的濃度為5-8％，所述次氯酸鈉的浸種時間為5-15min，所述清水沖洗次數為3-5次；

(3)刺五加內生真菌浸種培養：將刺五加內生真菌Alternaria alternata接種在液體培養基上，在搖床上搖7天，取刺五加種子，用75％酒精浸泡20-40s，用無菌水沖洗3-5次，5-8％次氯酸鈉處理5-15min，再用無菌水沖洗3-5次，將經上述處理的刺五加種子放入裝有內生真菌的錐形瓶中，繼續搖24-48h，120rpm，隨后用酒精和次氯酸鈉溶液對浸泡后的種子再次進行浸泡消毒，用75％酒精浸泡20-40s，用無菌水沖洗3-5次，5-8％次氯酸鈉處理5-15min，再用無菌水沖洗3-5次，消毒完畢后的刺五加種子放入經高壓滅菌的河沙里，并及時補充水分，所述刺五加種子與河沙按體積比1∶1-5混勻；

(4)取經步驟(3)處理的刺五加種子，用酒精和次氯酸鈉溶液對種子進行浸泡消毒，用75％酒精浸泡20-40s，用無菌水沖洗3-5次，5-8％次氯酸鈉處理5-15min，再用無菌水沖洗3-5次，再次用刺五加內生真菌Alternaria alternata懸液浸種共生3-7天，用酒精和次氯酸鈉溶液對浸泡后的種子進行浸泡消毒，用75％酒精浸泡20-40s，用無菌水沖洗3-5次，5-8％次氯酸鈉處理5-15min，再用無菌水沖洗3-5次；

(5)種子解除休眠：將經步驟(4)處理的刺五加種子平鋪于用高壓鍋滅菌的濕河沙中，種子與濕河沙按體積比1∶1-5混勻，裝入木箱或大花盆中進行混沙層積催芽，保持濕度50-70％，缺水時適量澆水，水中加1％新潔爾滅，刺五加種子變溫層積：第一階段：溫度保持在20-25℃，時間為10周，每日翻動一次；第二階段：刺五加種子溫度保持在10-15℃，時間為6周，2-3天翻一次；第三階段：刺五加種子溫度保持在0-5℃，時間為9周；

(6)取出經步驟(5)處理的刺五加種子，置于室溫培養箱下培養。

2.根據權利要求1所述的內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于，所述步驟(1)中刺五加成熟果實與水的重量比為10-20:1，所述淘洗次數為5-10次。

3.根據權利要求2所述的內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于，所述步驟(1)中刺五加成熟果實與水的重量比為10:1，所述淘洗次數為10次。

4.根據權利要求1所述的內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于，所述步驟(2)中次氯酸鈉的濃度為5％，所述次氯酸鈉的浸種時間為10min，所述清水沖洗次數為5次。

5.根據權利要求1所述的內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于，所述步驟(3)中，酒精浸泡時間為30s，使用無菌水沖洗3次，5％次氯酸按處理10min，再用無菌水沖洗5次，將經上述處理的刺五加種子放入裝有內生真菌的錐形瓶中，繼續搖36h，120rpm，隨后用酒精和次氯酸鈉溶液對浸泡后的種子再次進行浸泡消毒，用75％酒精浸泡30s，用無菌水沖洗3次，5％次氯酸鈉處理10min，再用無菌水沖洗5次，消毒完畢后的刺五加種子放入經高壓滅菌的河沙里，并及時補充水分，所述刺五加種子與河沙按體積比1∶2混勻。

6.根據權利要求1所述的內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于，所述步驟(4)中使用刺五加內生真菌Alternaria alternata懸液浸種共生6天。

7.根據權利要求1所述的內生真菌促進刺五加種子發芽的方法，其特征在于，所述步驟(5)中種子與濕河沙按體積比1∶2混勻，裝入木箱或大花盆中進行混沙層積催芽，保持濕度60％。