[發明專利]一種基于胎牛血清的培養基的培養方法

在審

• 申請號: 201810233420.2
• 申請日: 2018-03-21
• 公開（公告）號: CN108220232A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 王翔
• 申請（專利權）人: 天津博奧科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基于胎牛血清的培養基的培養方法，包括以下步驟：1)將下列成分及含量依次加入器皿中：胎牛血清：20ul/ml；重組人胰島素：5ug/ml；堿性成纖維細胞生長因子：4ng/ml；人轉鐵蛋白：5ug/ml；亞硒酸：6.84ug/ml；絲氨酸：105ug/ml；氯化膽堿：89.3ug/ml；腺嘌呤：12.2ug/ml；單乙酰胺：14ug/ml；磷酰乙醇胺：0.1mmol/ml；三碘甲狀腺氨酸：13.46pg/ml，每加入一種成分攪拌2～3分鐘；2)采用吸管吸取步驟1)中的液體3mL～5mL到15mLd離心管中，離心管以200g/min的轉速離心3min～5min，棄上清后置于細胞培養箱中培養2小時；3)吸取步驟2)中培養2小時后的細胞懸液，按體積比1:20～1:25接種量接種于DMEM培養液中，培養3天～4天后即得。本發明使間充質干細胞在細胞形態和增殖能力方面都得到了加強。

技術領域

本發明屬于血清培養液技術領域，特別涉及一種基于胎牛血清的培養基的培養方法，用于間充質干細胞。

背景技術

間充質干細胞【mesenchymal stem cells,MSC】是干細胞家族的重要成員，來源于發育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細胞，MSC最初在骨髓中發現，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注。如間充質干細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、心肌、內皮等多種組織細胞，連續傳代培養和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。

細胞培養在干細胞凍存中廣泛應用，目前用于培養間充質干細胞的培養基存在有影響細胞存活率的問題，目前尚未得到很好地解決。

發明內容

針對現有技術中存在的技術問題，本發明提供一種基于胎牛血清的培養基的培養方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種基于胎牛血清的培養基的培養方法，包括以下步驟：

1)將下列成分及含量依次加入器皿中：胎牛血清：20ul/ml；重組人胰島素：5ug/ml；堿性成纖維細胞生長因子：4ng/ml；人轉鐵蛋白：5ug/ml；亞硒酸：6.84ug/ml；絲氨酸：105ug/ml；氯化膽堿：89.3ug/ml；腺嘌呤：12.2ug/ml；單乙酰胺：14ug/ml；磷酰乙醇胺：0.1mmol/ml；三碘甲狀腺氨酸：13.46pg/ml，每加入一種成分攪拌2～3分鐘；

2)采用吸管吸取步驟1)中的液體3mL～5mL到15mLd離心管中，所述離心管以200g/min的轉速離心3min～5min，棄上清后置于細胞培養箱中培養2小時；

3)吸取步驟2)中培養2小時后的細胞懸液，按體積比1:20～1:25接種量接種于DMEM培養液中，培養3天～4天后，并定期觀察，即得。

作為優選，所述DMEM為高糖DMEM。

與現有技術相比，本發明所具有的有益效果是：本發明在通用型DMEM培養基的基礎上，添加包括胎牛血清在內的多種促進細胞生長的物質，使間充質干細胞在細胞形態和增殖能力方面都得到了加強。

具體實施方式

為使本領域技術人員更好的理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作詳細說明。

一種基于胎牛血清的培養基的培養方法，包括以下步驟：