[發明專利]一種區分羊絨皮質細胞的染色方法

在審

• 申請號: 201810230662.6
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108486922A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 劉月琴;張英杰;段春輝;高昆;李閏婷;王康;尹雪姣;楊若晨;曹文新
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: D06P1/42
• 分類號: D06P1/42;D06P3/18;D06L1/02;D06M10/08
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王闖

本發明提供了一種區分羊絨皮質細胞的染色方法。方法為：將羊絨浸泡在石油醚與無水乙醇的混合液中，進行水浴加熱1h，完成脫脂處理；所述水浴加熱的溫度為37℃；然后依次進行羊絨鱗片層的剝離和皮質細胞的染色；所述混合液中，石油醚與無水乙醇的體積比為1:1。本發明的染色工藝更省時省力，對操作人員的危害性小，對羊絨正、副皮質細胞的染色區分度高，正皮質細胞被染成深藍色，副皮質細胞被染成淺藍色，而且兩者的染色更均勻，呈現出絢麗的漸變色彩。

技術領域

本發明涉及染色工藝領域，尤其是一種區分羊絨皮質細胞的染色方法。

背景技術

目前，對羊毛的區分正、副皮質細胞的研究很多，主要有的染料有2％氯化金水、亞甲基藍、還原-銀染色等。但是對羊絨區分正、副皮質細胞的研究還沒有報道。羊毛纖維由約含80～90％的皮質層和10％左右的鱗片層以及少量的纖維表面膜組成。羊毛從外到內的由鱗片層和皮質層組成，鱗片層的存在使羊絨具有獨特的氈縮性能而皮質層是組成羊毛的主體，對羊毛纖維的物理化學和機械性能起著決定作用。羊毛的外在形態特征是由其內部結構決定的，因此皮質層和皮質細胞的研究就十分重要了。羊毛的皮質層和皮質細胞包含著正皮質層和正皮質細胞以及副皮質層和副皮質細胞。在羊毛中正、副皮質細胞的含量約2:1，在羊毛纖維結構中呈雙邊分布。正皮質層分布在卷曲羊毛卷曲波的外側，副皮質層分布在卷曲波的內側。由于兩部分在結構上的差異，正、副皮質細胞的受力情況不同，可能是導致羊毛彎曲的根本原因。本文根據羊毛的基本特性，深入研究羊絨的皮質細胞的結構特征。從羊絨的皮質細胞的含量和分布的結構進行分析其彎曲的原因顯得尤為重要。羊絨從外到內分為兩層，外表是由鱗片層構成，內層是由皮質細胞層構成。羊絨的鱗片層由片狀鱗片細胞組成，鱗片細胞的抱合力很強對羊絨的皮質細胞主要起保護作用。鱗片層容易被酸、堿、氧化劑、還原劑破壞。由于鱗片層和皮質層之間有非均一性的細胞粘合物，即細胞間質。細胞粘合物甘氨酸和酪氨酸含量很高，甲酸是二者的可溶物。甲酸對皮質細胞也有腐蝕作用，所以要嚴格把控甲酸回流的時間，本文中采用高效快速的甲酸回流和超聲波震蕩相結合的方法進行破壞細胞間質，并溶脹和軟化鱗片，從而將鱗片層剝離，同時也不破壞皮質細胞，使皮質細胞可以有效的染色。因此必須先對羊絨進行脫鱗片，使皮質細胞能夠暴露出來，讓染料可以充分與皮質細胞結合，HiroshiSakabe等通過堿性染料甲基藍和孔雀綠對經甲酸和蛋白酶處理的美利奴羊毛的雙邊染色機制進行了研究。正、副皮質細胞中非角質化蛋白質網絡結構存在差異，尤其是正、副皮質細胞間結構的不同，正皮質細胞層的細胞間質結構的滲透性比副皮質細胞層的滲透性好，它提供了染料的通道和結合基，在堿性染料的染色中起著至關重要的作用，細胞間質的雙邊分布最終導致了染色密度的不同。本試驗中1％亞甲基藍溶液是堿性染料，所以正皮質細胞被染成深藍色，副皮質細胞被染成淺藍色。

目前，對羊毛區分正、副皮質細胞的染色方法一般為如下的過程。

第一步，羊毛在染色前用實驗室常規方法進行脫脂和除雜質，任意選取羊毛5g，卷入濾紙筒中，在索式提取器中先用乙醚提取8h，每小時循環8-10次，然后在用無水乙醇提取8h，每小時8-10次，取出，揀去雜質。將上述試劑在燒杯中用50℃蒸餾水反復洗滌5次，每次3min，然后移入濃度為5％的精制烷基苯磺酸鈉(不含堿，防止纖維損傷)溶液中，45℃洗滌5次，每次5min，再用蒸餾水(50℃)洗滌5次，每次5min，以去除吸附的烷基苯磺酸鈉。必須注意，在上述處理溫度勿高，并避免劇烈攪動，否則發生氈縮，則試驗就很難進行。凈化的試樣脫水后晾干。