[發(fā)明專利]一種對(duì)柑橘砂皮病菌有抑制作用的細(xì)菌及其篩選方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810230078.0
• 申請(qǐng)日: 2018-03-20
• 公開（公告）號(hào): CN108384736B
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 易圖永;龍兆雨;洪艷云;何可佳;謝深喜;戴良英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 11039 北京知本村知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 劉江良

本發(fā)明公開了一株能安全、無毒、有效的防治柑橘砂皮病（Diaporthe medusaea）的拮抗細(xì)菌短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）Y2菌株及其應(yīng)用與篩選方法。短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）Y2菌株為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，其保藏號(hào)為CGMCC No.14420。同時(shí)，該菌對(duì)柑橘炭疽菌、辣椒疫霉菌、草莓灰霉菌、水稻紋枯菌也有一定的抑制作用。目前國(guó)內(nèi)還很少有柑橘砂皮病拮抗菌的報(bào)道，尤其是沒有報(bào)道短小芽孢桿菌對(duì)柑橘砂皮病菌的抑制作用。因此，該拮抗菌株具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種對(duì)柑橘砂皮病菌有抑制作用的新菌株及其篩選方法。

背景技術(shù)

柑橘砂皮病（Diaporthe medusaea）是一種真菌性病害，也被稱為黑點(diǎn)病，屬于柑橘樹脂病的一種。柑橘砂皮病的病原菌的有性態(tài)為柑橘座間菌(Diaporthe citri)，孢子形態(tài)為橢圓形或紡錘形，無色，雙胞。無性態(tài)為柑橘擬莖點(diǎn)霉菌(Phomopsis citri)，其孢子分為α與β兩種。α型孢子為紡錘形，無色，正直，常具2個(gè)油球（一端一個(gè)），有時(shí)油球更多，單胞。β型孢子為線形，無色，正直或者鉤狀，無油球，單胞。柑橘砂皮病雖然不會(huì)直接導(dǎo)致產(chǎn)量損失，但它嚴(yán)重影響了柑橘的外觀品質(zhì)，從而降低了柑橘的經(jīng)濟(jì)效益。

柑橘砂皮病的病原菌是一種弱寄生菌，病原菌容易侵入生長(zhǎng)衰弱或受傷的柑橘樹為害。因此，柑橘樹遭受凍害造成的凍傷和其他傷口，是本病發(fā)生流行的首要條件。如上年低溫使樹干凍傷，往往次年溫濕度適合時(shí)病害就可能大量發(fā)生。此外，多雨季節(jié)也常常造成砂皮病（樹脂病）大量發(fā)生，主要為害果實(shí)、葉片和莖。柑橘砂皮病通常表現(xiàn)為柑橘的葉片和果實(shí)上出現(xiàn)紅褐至黑色的硬質(zhì)小黑點(diǎn)，密度疏密不一，就像粘了砂子一樣，故稱“柑橘砂皮病”。正因?yàn)槿绱耍沟酶涕偻庥^受到嚴(yán)重影響，柑橘的價(jià)格大打折扣，從而讓廣大果農(nóng)遭受重大的經(jīng)濟(jì)損失。柑橘砂皮病的病原菌通過菌絲、分生孢子器和分生孢子在病樹組織內(nèi)越冬，來年春季的時(shí)候產(chǎn)生大量的分生孢子在枯枝上，可以通過昆蟲和雨水進(jìn)行傳播，病原菌可以從傷口處侵入。分生孢子器全年產(chǎn)生分生孢子，在降雨充沛、低溫潮濕的情況下， 產(chǎn)生的孢子數(shù)量最多，因此在第二年的春季環(huán)境的條件十分適宜該病原菌的傳播與生長(zhǎng)。有人指出，這些黑點(diǎn)的出現(xiàn)，是柑橘作為寄主本身做出防衛(wèi)反應(yīng)的產(chǎn)物。也有研究指出，柑橘砂皮的發(fā)病條件也與柑橘屬的種質(zhì)有一定關(guān)系。

目前來看，化學(xué)藥劑是防治柑橘砂皮病的主要方法。但是長(zhǎng)期單一使用某一化學(xué)藥劑，容易產(chǎn)生抗藥性，影響防治效果。同時(shí)，化學(xué)藥劑對(duì)環(huán)境影響大以及對(duì)人體健康的潛在危害。因此，篩選對(duì)柑橘砂皮病菌有抑制作用的微生物是防治柑橘砂皮病的最佳途徑。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問題，本發(fā)明人從湖南省長(zhǎng)沙市芙蓉區(qū)的瀏陽河邊采集土壤樣品，利用NB培養(yǎng)基通過稀釋平板法獲得細(xì)菌的單菌落，再采用平板對(duì)峙法篩選對(duì)柑橘砂皮病菌有抑制作用的細(xì)菌。篩選到的短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）對(duì)人畜無致病性，能安全地用于柑橘砂皮病的生物防治。同時(shí)，該菌對(duì)柑橘炭疽菌、辣椒疫霉菌、草莓灰霉菌、水稻紋枯菌也有一定的抑制作用。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：一種對(duì)柑橘砂皮病菌有抑制作用的細(xì)菌，其是保藏號(hào)為CGMCC No. 14420的短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus）Y2菌株，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

該細(xì)菌（短小芽孢桿菌，Bacillus pumilus） Y2菌株已于2017年 7月 13 日為中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心CGMCC所保藏（保藏地址是：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)），其保藏號(hào)為CGMCC No. 14420，經(jīng)檢測(cè)存活。