[發明專利]一種用于鑒別診斷BHD綜合征與原發性自發性氣胸的血漿microRNA標記物及應用

有效

• 申請號: 201810228266.X
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108220427B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 閔海燕;易龍;高千
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 江蘇銀創律師事務所 32242
• 代理人: 何震花

本發明公開了一種用于鑒別診斷BHD綜合征與原發性自發性氣胸(PSP)的血漿microRNA標記物及應用。該標志物由let?7d、或者miR?424或者let?7d與miR?424的組合組成，該標志物可有效地從PSP群體中篩查出單純肺型BHD個體。本結果的應用將優化PSP與肺型BHD綜合征的臨床鑒別診斷的策略，也能夠為疾病的治療靶點提供線索。

技術領域

本發明屬于生物技術和診斷學領域，具體涉及用于鑒別診斷BHD綜合征與原發性自發性氣胸的血漿microRNA標志物及應用。

背景技術

原發性自發性氣胸(PSP)是一種病因不明、易復發、難治愈的外科急癥。在無明顯誘因且無潛在臨床肺部疾病的情況下，胸膜臟層破裂及隨之形成的肺部坍塌和缺氧。氣體進入患者的胸膜腔，造成肺不張和低氧血癥，重者可發生呼吸困難，危及生命。雖然PSP的發病分子機制至今不明，有一點臨床共識是肺大泡(Cyst)的病理形成是PSP發生的共同結構基礎。研究發現約有10％的PSP患者存在家族史，表明這些患者氣胸的發生與遺傳相關。多種遺傳綜合征都伴有氣胸/肺大泡臨床癥狀，如馬凡氏綜合征，埃勒斯-當洛綜合征，高胱氨酸尿癥和α1-抗胰蛋白酶缺乏癥[5-8]。一般說來，氣胸/肺大泡通常不是這些遺傳綜合征的初期和唯一表型，伴隨著其他體征，使它們在臨床上相對容易鑒別。

BHD綜合征(BHDS，Birt-Hogg-Dube綜合征)是一種常染色體顯性遺傳病，以皮膚纖維毛囊瘤、肺大泡和/或自發性氣胸以及腎癌為主要臨床特征[9]。BHDS的臨床表型具有外顯不全和多樣性，導致BHDS患者僅僅表現出一種臨床癥狀，如肺大泡/氣胸。僅僅表現出肺部臨床癥狀而無皮膚和腎臟表型的BHDS患者在臨床上被當成單純性PSP接受治療。但是，有研究表明，單純肺型BHD(BHD-PSP)病人具有高出正常人7倍的腎癌風險，并且他們的一級親屬也是高危人群。因此，必須從臨床單純性PSP病人群體中鑒別診斷出BHD患者，并對患者及其一級親屬進行嚴格的臨床追蹤，以便于對腎癌的早期識別和治療。

目前，診斷單純肺型BHDS病人的唯一有效手段是對其致病基因FLCN的遺傳檢測，包括Sanger測序和基因拷貝數檢測。我們的研究表明，在中國PSP患病人群中，約有10％患者為FLCN突變攜帶者，即表現為單純肺型的BHD病人。雖然遺傳檢測是診斷BHD-PSP最直接和精確的方法，但是，在大樣本的PSP群體中有近90％并不是BHDS患者，卻因被認為是疑似人群而進行flcn基因檢測。基因檢測目前還屬于收費較高的檢測項目，對于我國農村或偏遠地區的人群來說，費用高昂。而基因檢測技術，相比較其他臨床檢測技術，操作相對復雜，結果分析需要較長時間，直接使用基因檢測對疑似BHD-PSP的群體進行診斷，是人力、物力和財力的巨大浪費。因此，需要一種有效、經濟、易操作且帶有掃描性質的技術對整個BHD-PSP疑似群體進行篩查。

成熟miRNA是一類進化高度保守的內源性非編碼單鏈RNA，長約19～25個核苷酸，能夠在轉錄后水平調控蛋白合成，參與多種生物學信號通路的調節。成熟miRNA的異常表達與多種人類疾病密切相關，在血液中又能穩定存在，可以作為無創性的生物標記物，相關試驗研究在多種疾病中開展，包括癌癥、損傷類疾病、甚至遺傳病。

綜上所述，臨床PSP群體中有約10％是BHD-SPS，這一部分人群具有腎癌的高風險，且其一級親屬也存在相似風險，必須早期鑒別診斷，以利于腎癌的早期識別和防治。而現有診斷技術只有flcn基因的遺傳檢測，若在臨床推廣具有成本高卻收益低、操作相對復雜且耗時長等不足。因此，可以利用臨床樣本，找到與BHD綜合征相關且普通原發性自發性氣胸表達存在差異的血漿miRNA，評估其作為標記物準確性。在此基礎上，可以將檢測血漿miRNA的表達水平作為一種篩查性診斷BHD-PSP的常規手段，掃描疑似BHD-PSP的群體，以提高后續flcn基因檢測的效率，優化臨床BHD-PSP診斷策略。

發明內容

本發明的目的是提供用于鑒別診斷BHD綜合征與原發性自發性氣胸的血漿miRNA標志物，并以此為基礎制備基于microRNA的、用于鑒別診斷BHD綜合征與原發性自發性氣胸的試劑盒。