[發明專利]一種高轉染效率低細胞毒性的陽離子基因載體及其制備方法有效
| 申請號： | 201810228137.0 | 申請日： | 2018-03-20 |
| 公開（公告）號： | CN108384810B | 公開（公告）日： | 2021-07-23 |
| 發明（設計）人： | 田華雨;方華攀;林琳;郭兆培;陳杰;孫平杰;陳學思 | 申請（專利權）人： | 中國科學院長春應用化學研究所 |
| 主分類號： | C12N15/87 | 分類號： | C12N15/87;C12N15/85;C08G63/91 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 130022 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 轉染 效率 細胞 毒性 陽離子 基因 載體 及其 制備 方法 | ||
1.一種高轉染效率低細胞毒性的陽離子基因載體，包括線性聚-α-賴氨酸和接枝在所述線性聚-α-賴氨酸上的對甲苯磺酰基保護的精氨酸；
所述線性聚-α-賴氨酸與對甲苯磺酰基保護的精氨酸的摩爾比為1：（5~120）；
所述聚-α-賴氨酸的數均分子量為3000~15000。
2.一種高轉染效率低細胞毒性的陽離子基因載體的制備方法，包括以下步驟：
A）將C8H17N3.HCl和1-羥基苯并三唑加入對甲苯磺酰基和叔丁氧羰基雙保護的精氨酸的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，進行活化；
B）將線性聚-α-賴氨酸的水溶液加入所述步驟A）中活化后的溶液中，進行反應；
所述線性聚-α-賴氨酸與對甲苯磺酰基和叔丁氧羰基雙保護的精氨酸的摩爾比為1：（5~120）；所述線性聚-α-賴氨酸的數均分子量為3000~15000；
C）將所述步驟B）中反應后的溶液依次進行透析、凍干，得到中間產物；
D）將所述中間產物與三氟乙酸進行反應，加入無水乙醚沉降后，進行真空抽干和透析，得到陽離子基因載體。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述線性聚-α-賴氨酸水溶液的濃度為0.01~0.5mg/mL。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述甲苯磺酰基和叔丁氧羰基雙保護的精氨酸的N,N-二甲基甲酰胺溶液的濃度為0.01~0.5mg/mL。
5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述C8H17N3.HCl、1-羥基苯并三唑和對甲苯磺酰基保護的精氨酸的摩爾比為（1~5）：（1~5）：1。
6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟A）中的活化溫度為20~35℃；
所述步驟A）中活化的時間為0.5~3小時。
7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟B）中反應的溫度為20~35℃；
所述步驟B）中反應的時間為60~80小時。
8.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟C）中透析的分子量為1000~3500；
所述步驟C）中透析的時間為60~80小時。
9.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟C）中凍干的溫度為-50~-80℃。
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