[發明專利]一種基于DNAWalker的適配體傳感器、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201810227931.3
• 申請日: 2018-03-20
• 公開（公告）號: CN108872582B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 王廣鳳;楊新勝
• 申請（專利權）人: 安徽師范大學
• 主分類號: G01N33/66
• 分類號: G01N33/66;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 任晨晨

1.一種基于DNA Walker的適配體傳感器的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

1)將拋光處理后的金電極浸入蔗糖酶與巰基標記的基底DNA復合物的緩沖溶液中，培養，然后取出，清洗，得到修飾了基底DNA的金電極；

2)將步驟1)得到的修飾了基底DNA的金電極浸入適配體DNA的緩沖溶液，培養，清洗，得到雙鏈修飾的金電極；

3)將步驟2)得到的修飾雙鏈的金電極浸入AFB1的緩沖溶液中，培養，清洗，得到修飾了基底DNA的金電極；

4)將步驟3)得到的修飾了基底DNA的金電極浸入Walker DNA緩沖溶液和鉛離子溶液的混合液中，培養，得到含有蔗糖酶的溶液；

5)將步驟4)得到的含有蔗糖酶的溶液加入蔗糖溶液中，培養，得到含有葡萄糖的溶液；

6)將步驟5)得到的含有葡萄糖的溶液滴在血糖儀試紙上，得到代表葡萄糖含量的數值；

步驟1)中蔗糖酶與巰基標記的基底DNA復合物的緩沖溶液是指：0.4mL 20mg/mL蔗糖酶加入到含有20mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5mM N-N-羥基琥珀酰亞胺的緩沖溶液中，4℃下培養1.5h-2h，再加入50μL 100μM氨基修飾的基底DNA緩沖溶液，在4℃下反應10h-12h，得到的蔗糖酶與基底DNA的復合物用Amicon-100K純化，然后溶解在100μL PBS緩沖溶液，得到蔗糖酶與巰基標記的基底DNA復合物的緩沖溶液，備用；

步驟1)中基底DNA序列為：

5'-SH-GGGCCTAGCGArAGGGCACGAGACACAGAGAGACAACACGTGCCCAAC-NH₂-3'。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中適配體DNA的序列為：

5'-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCC-3'。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟4)所述Walker DNA緩沖溶液和鉛離子溶液的混合液制備方法為：將購買的Walker DNA溶解在緩沖溶液中，得到濃度為1μM的緩沖溶液，在4℃下保存備用；將5μL濃度為5μM的鉛離子溶液與20μL制備的1μM的Walker DNA緩沖溶液混合，即得。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中Walker DNA的序列為：

5’-TGTCTTGTGCTCCGAGCCGGTCGAAATCGCTAGGC-3’。

5.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中的培養是指：室溫下1.5h-2h。

6.一種權利要求1-5任一項所制備的基于DNA Walker的適配體傳感器。

7.一種權利要求6所述的基于DNA Walker的適配體傳感器的應用，其特征在于，用于檢測AFB1。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，檢測方法為：

在傳感器制備過程中，通過改變AFB1的濃度，得到不同含量的蔗糖酶溶液，加入足量的蔗糖溶液中，得到不同濃度的葡萄糖溶液，取得到的葡萄糖溶液滴在血糖儀試紙上，用血糖儀檢測葡萄糖含量，得到不同濃度的AFB1相應的血糖儀信號，構建線性關系。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，AFB1的濃度分別為0.02,0.03,0.04,0.05,0.1,0.5,1,5和10nM。