[發明專利]一種同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法在審
| 申請號： | 201810225802.0 | 申請日： | 2018-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN108531420A | 公開（公告）日： | 2018-09-14 |
| 發明（設計）人： | 韓培培;閆榮榮;賈士儒;婁倩倩;趙冬雪;鐘成 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/38;C12P19/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人： | 趙瑤瑤 |
| 地址： | 300222 天津市河*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 發菜細胞 誘導 培養液 二氯苯氧乙酸 發菜細胞培養 大規模培養 胞外多糖 發菜多糖 生產調節 生產效率 培養基 上清液 種子液 發菜 外源 | ||
1.一種同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：向發菜培養基內加入2,4-二氯苯氧乙酸。
2.根據權利要求1所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：所述2,4-二氯苯氧乙酸的終濃度為0.03-0.3mg/L。
3.根據權利要求1所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：方法包括以下步驟：
⑴在新鮮無菌的含外源N的BG-11培養基中接入3～10％(v/v)的發菜細胞種子液，于20-30℃恒溫，1000-2500lux光照強度條件下進行培養；
⑵分別采用兩種方式誘導發菜細胞提高其細胞密度和多糖產量：
向步驟⑴中培養至第4-6天的發菜培養液添加0.1-1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸；
或者，在步驟⑴發菜細胞培養的4-6天，每天向培養基中添加0.03-0.3mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸；
⑶培養步驟⑵所述發菜細胞至15-20d結束培養，采用高速離心或篩網過濾的方法分離發菜細胞和發菜培養液的上清液，分別用于收集藻粉和提取胞外多糖。
4.根據權利要求3所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：所述步驟⑴中BG-11培養基所含外源N為1-2g/L的NaNO3或0.1-1g/L的尿素。
5.根據權利要求3所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：所述步驟⑶所述的發菜胞外多糖的提取步驟如下：
細胞培養液3000-5000rpm離心5-15min，收集上清。上清液減壓旋蒸濃縮后，向濃縮液中加入4倍體積無水乙醇，使乙醇終濃度為80％，4℃中過夜醇沉，離心，收集沉淀物，冷凍干燥獲得粗胞外粗多糖粉末。
6.根據權利要求3所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：步驟⑶所述的藻粉采用冷凍干燥、50-80℃烘干或噴霧干燥的方法獲得。
7.根據權利要求6所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：所述噴霧干燥的進風溫度170-230℃,進料濃度70-80g/L,進料速度80-120mL/h。
8.根據權利要求6所述的同時提高發菜細胞密度和多糖產量的方法，其特征在于：所述冷凍干燥的真空壓力50-80mTorr，溫度-50℃，凍干10h。
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