[發明專利]一種H-FABP和cTnI二聯高效檢測試紙

在審

• 申請號: 201810225535.7
• 申請日: 2018-03-19
• 公開（公告）號: CN108445220A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 張雷
• 申請（專利權）人: 南京博天科智生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種H?FABP和cTnI二聯高效檢測試紙，其特征在于：包括設在固定板上依次相連的樣品墊(1)、金標墊(2)、硝酸纖維素膜(3)和吸收墊(4)；在硝酸纖維素膜(3)上設有檢測線抗體(5)和質控線抗體(6)；在金標墊(2)上設有金標抗體，所述的樣品墊(1)為玻璃纖維棉制成的墊，所述的金標墊(2)為羧化纖維素膜制成的墊，所述的金標抗體為顯色抗體，檢測線抗體為捕捉抗體，顯色抗體與捕捉抗體為2株可互相配對形成夾心的抗人H?FABP單克隆抗體，所述的金標抗體用40nm納米金殼標記，所述金標墊上設有功能層。本發明通過特定功能層的金標墊和浸泡工藝，能夠使得檢測時樣品之間避免相互干擾，能夠大大提高檢測精度。

技術領域

本發明屬于生物技術應用領域，具體涉及一種心型脂肪酸結合蛋白H-FABP(Heart-typeFattyAcidBindingProtein，H-FABP)和心肌鈣蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)cTnI二聯高效檢測試紙。

背景技術

H-FABP存在于心肌細胞胞漿內，含量豐富。心肌受損早期，心肌細胞膜完整性被破壞，H-FABP進入血液。H-FABP在心肌受損后1-2h即可在血液中檢測到。由于H-FABP心肌特異性高于目前臨床常用的肌紅蛋白，因此H-FABP可成為一種重要的檢測急性心肌組織損傷的早期特異性標志物。目前，生化標志物的檢測已廣泛應用于急性心肌梗死、不穩定型心絞痛、急性心衰、心肌炎、心臟手術損傷評估、窒息新生兒心肌損傷等心肌損傷疾病的診斷、危險度分層和預后評判。美國每年因懷疑性冠狀動脈綜合征急診就醫病人達8000萬，其中45％左右與心臟相關，15％診斷為急性冠脈綜合征。我國急性冠狀動脈綜合征的發病率約50/10萬，每年死于急性心肌梗死的人數超過100萬。因此，H-FABP檢測的應用具有重要的社會和經濟效益。

當心肌細胞因缺血缺氧等因素遭破壞時，游離型cTnI和cTnT可首先迅速從細胞中釋放入血，隨后結合于心肌結構蛋白中的結合型cTnI和cTnT逐漸分解，緩慢釋放入循環血中，從而解釋了以心肌細胞受損為表現的疾病，如急性心肌梗死(AMI)，cTnI和cTnT在循環血中較早出現并能持續較長時間的原因。

所以H-FABP和cTnI對于心肌健康來講是非常重要的健康指標參數。現有技術不能同時高效檢測兩種物質，檢測時物質相互干擾，反而使金標墊的檢測靈敏度降低。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種H-FABP和cTnI二聯高效檢測試紙，使其具有操作簡便、靈敏度＜5ng/mL、結果穩定等優點。

發明內容：本發明提供了一種H-FABP和cTnI二聯高效檢測試紙，包括設在固定板上依次相連的樣品墊(1)、金標墊(2)、硝酸纖維素膜(3)和吸收墊(4)；在硝酸纖維素膜(3)上設有檢測線抗體(5)和質控線抗體(6)；在金標墊(2)上設有金標抗體，所述的樣品墊(1)為玻璃纖維棉制成的墊，所述的金標墊(2)為羧化纖維素膜制成的墊，所述的金標抗體為顯色抗體，檢測線抗體為捕捉抗體，顯色抗體與捕捉抗體為3株可互相配對形成夾心的抗人H-FABP和cTnI單克隆抗體所述的金標抗體用40nm納米金殼標記，所述金標墊上設有功能層，所述金標墊通過碳酸氫鈉、牛血清白蛋白、酷蛋白以及聚氧烯月桂醚混合液浸泡。

進一步地，所述功能層以質量分數計由18％純硝酸銀、70％明膠、8％的司本80以及4％的環糊精組成。

進一步地，所述金標墊由80％碳酸氫鈉溶液、8％牛血清白蛋白、8％酷蛋白以及4％聚氧烯月桂醚混合液浸泡。

上述的H-FABP和cTnI二聯高效檢測試紙的制備方法，包括以下步驟：

(1)采用以檸檬酸三鈉為穩定劑和還原劑，制備出單分散的銀納米顆粒作為犧牲模板，通過置換反應獲得膠體級、高分散的40nm金納米殼；

(2)調節納米金殼溶液pH8.0～8.5，加入顯色抗體與納米金殼溶液反應，離心得沉淀，重懸沉淀，得金標抗體溶液；