[發(fā)明專利]一種食品中AGEs含量的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810224373.5
• 申請(qǐng)日: 2018-03-19
• 公開（公告）號(hào): CN108776131B
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱鳳;何建安;劉春曉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市南山區(qū)疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號(hào): G01N21/76
• 分類號(hào): G01N21/76
• 代理公司: 深圳市瑞方達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 44314
• 代理人: 張秋紅

本發(fā)明涉及食品中AGEs含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：調(diào)節(jié)待測(cè)食品的pH值，并對(duì)待測(cè)食品進(jìn)行粉碎、振蕩、離心，取其上清液并配置為系列濃度的待檢測(cè)樣品以及配置系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品并分別加入HRP進(jìn)行標(biāo)記得到HRP標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品；采用BSA溶液對(duì)微孔板進(jìn)行包被制得BSA修飾的微孔板；采用CML單克隆抗體對(duì)BSA修飾的微孔板進(jìn)行包被制得特異性抗體包被的微孔板；將系列濃度HRP標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品和系列濃度的待檢測(cè)樣品加入至特異性抗體包被的微孔板中并標(biāo)記為A組，將系列濃度HRP標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品加入另一個(gè)特異性抗體包被的微孔板中并標(biāo)記為B組，分別進(jìn)行發(fā)光處理，分別計(jì)算A組和B組底物降解量之差，獲取待檢測(cè)樣品中AGEs含量數(shù)據(jù)。該方法具有高靈敏度、操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品檢測(cè)領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，涉及一種食品中AGEs含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycationendproducts AGEs)主要通過(guò)美拉德反應(yīng)形成，是在非酶促條件下，蛋白質(zhì)、氨基酸、脂類或核酸等大分子物質(zhì)的游離氨基與還原糖的醛基經(jīng)過(guò)縮合、重排、裂解、氧化修飾后產(chǎn)生的一組穩(wěn)定的不可逆的終末產(chǎn)物。研究表明，AGEs在體內(nèi)的積聚與糖尿病、腎病、心(腦)血管疾病、心衰、動(dòng)脈(粥樣)硬化、衰老、猝死等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后都有密切的關(guān)系，已經(jīng)成為公認(rèn)的多種疾病、事件、死亡的獨(dú)立強(qiáng)烈預(yù)測(cè)因子，也是“健康人”發(fā)生意外的強(qiáng)烈預(yù)測(cè)因子。AGEs包括羧甲基賴氨酸(CML)、羧乙基賴氨酸(CEL)、戊糖苷素(pentosidine)等。相比較而言，CML更加常見(jiàn)和穩(wěn)定，也是AGEs的主要抗原表位，可作為免疫檢測(cè)的指示。目前已經(jīng)制定了CML的單克隆抗體，用于AGEs檢測(cè)和定位等研究。

研究表明，日常膳食中含有大量的AGEs，是外源性AGEs主要來(lái)源。食品中的AGEs含量與食品的營(yíng)養(yǎng)成分(高蛋白高脂肪食物中AGEs含量最高)和加工方式有密切關(guān)系，隨著加熱時(shí)間的延長(zhǎng)和加熱程度的增加，AGEs的形成急劇增加，并通過(guò)膳食攝入進(jìn)入體內(nèi)。已經(jīng)證明控制膳食AGEs攝入和參加體育鍛煉是安全地減少血液循環(huán)中AGEs的方法。我國(guó)人群膳食結(jié)構(gòu)中存在大量油炸、烘烤食品，且消費(fèi)人口多，消費(fèi)量大，有必要對(duì)不同加工方式食品中的AGEs進(jìn)行摸底，指導(dǎo)膳食。

研究表明，相比較其他種類的AGEs,CML更加常見(jiàn)和穩(wěn)定，并檢測(cè)方法也較成熟，常作為食品和生物體系中美拉德反應(yīng)的指示。傳統(tǒng)的AGEs檢測(cè)方法主要有ELISA、質(zhì)譜等方法，前者靈敏度存在一定的局限性，而后者需要繁瑣的前處理過(guò)程。基于氣相色譜-質(zhì)譜連用，或者液相色譜-質(zhì)譜連用。檢測(cè)方法復(fù)雜，所需的儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)室條件要求也較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于，提供一種能夠解決食品中AGEs含量檢測(cè)存在靈敏度低，檢測(cè)復(fù)雜，檢測(cè)所需儀器設(shè)備和實(shí)驗(yàn)條件要求高等弊端的檢測(cè)方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：構(gòu)造一種食品中AGEs含量的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

調(diào)節(jié)待測(cè)食品的pH值，并對(duì)所述待測(cè)食品進(jìn)行粉碎、振蕩、離心，取其上清液并配置為系列濃度的待檢測(cè)樣品，以及配置系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品并分別加入HRP進(jìn)行標(biāo)記得到HRP標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品；

采用BSA溶液對(duì)微孔板進(jìn)行包被，制得BSA修飾的微孔板；

采用CML單克隆抗體對(duì)所述BSA修飾的微孔板進(jìn)行包被，制得特異性抗體包被的微孔板；

將系列濃度HRP標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品和所述系列濃度的待檢測(cè)樣品加入至所述特異性抗體包被的微孔板中，并標(biāo)記為A組，將將所述系列濃度HRP標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品加入另一個(gè)特異性抗體包被的微孔板中，并標(biāo)記為B組，分別進(jìn)行發(fā)光處理，計(jì)算A組和B組底物降解量之差，獲取待檢測(cè)樣品中AGEs含量數(shù)據(jù)。

優(yōu)選地，所述S1步驟包括以下步驟：

待測(cè)食品為固體食品，稱取該待測(cè)的固體食品，將所述待測(cè)的固體食品剪碎并研磨至糊狀或小顆粒狀；