[發明專利]一種動態觀察細胞遷移的裝置及其方法

在審

• 申請號: 201810222740.8
• 申請日: 2018-03-16
• 公開（公告）號: CN108165491A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 王旭
• 申請（專利權）人: 江蘇大學附屬醫院
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12Q1/02
• 代理公司: 佛山粵進知識產權代理事務所(普通合伙) 44463
• 代理人: 易朝暉

1.一種動態觀察細胞遷移裝置，其特征在于：由裝有所述凝膠狀瓊脂糖(1)的圓形培養皿(2)，培養皿中凝膠狀瓊脂糖圍成的細胞用孔(3)，培養皿中凝膠狀瓊脂糖圍成的且與細胞用孔間隔距離的趨化物用孔(4)，培養皿中連通細胞孔與趨化物用孔的凝膠狀瓊脂糖下細胞遷移觀察區域(5)，趨化物孔(4)內的趨化物在凝膠狀瓊脂糖下緩慢向四周彌散，在細胞遷移觀察區域(5)中形成穩定的趨化物濃度差，細胞用孔(3)內的細胞識別趨化物濃度差后發生定向趨化，在凝膠狀瓊脂糖下發生遷移，向趨化物孔方向趨化，所述培養皿系細胞培養級別，底部為透光材質，采用倒置顯微鏡觀察細胞的遷移。

2.根據權利要求1所述的動態觀察細胞遷移裝置，其特征在于，所述細胞用孔與趨化物用孔直徑均為3.5mm，深度均為3.2mm，間隔距離為2.4mm。

3.一種如權利要求1至2任一項所述的動態觀察細胞遷移裝置的制備方法，其特征在于：

(1)配置A液：在50mL離心管內依次加入18mL RPMI 1640培養液、2mL澳洲胎牛血清、2mL10×含鈣鎂HBSS、8mL濾菌雙蒸水，渦旋振蕩器上劇烈震蕩15秒，充分混勻液體；

(2)配置B液：在50mL離心管內依次加入10mL濾菌雙蒸水、0.48g低熔點超純去熱源瓊脂糖，渦旋振蕩器上劇烈震蕩15秒，充分混勻液體；

(3)配置A、B混合液：將A液放入68℃水浴箱中，水浴35分鐘，將B液用微波爐加熱至沸騰；使用移液器將A液吸至B液離心管內，渦旋振蕩器上劇烈震蕩15秒，使A、B液充分混勻；

(4)制作凝脂狀瓊脂糖：移液器吸取A、B混合液3mL至培養皿2中，室溫下冷卻1小時，再放入4℃冰箱冷卻1小時，即可形成凝脂狀瓊脂糖；

(5)制作細胞用孔、趨化物用孔：培養皿中的凝脂狀瓊脂糖上分別制作直徑均為3.5mm、深度均為3.2mm、孔間距為2.4mm的兩個小孔，負壓吸引器吸除孔內的凝膠狀瓊脂糖后室溫靜置30分鐘，再次用負壓吸引器吸除孔內析出的液體，左側小孔即為細胞用孔(3)，右側小孔即為趨化物用孔(4)。

4.一種動態觀察細胞遷移的方法，其特征在于：

(1)向權利要求1至3任一項所述的動態觀察細胞遷移裝置中分別加入細胞、趨化物：細胞用孔內小心加入10μL細胞懸液，細胞總量10⁵個，趨化物用孔內小心加入10μL趨化物，濃度為0.1-1μmol/L；趨化物在凝膠狀瓊脂糖下擴散并能形成穩定的濃度梯度，距趨化物用孔越近趨化物濃度越高，細胞用孔內的細胞則可感受到外界趨化物的濃度變化，并發生定向遷移；

(2)設置活細胞工作站細胞相關參數：打開活細胞工作站細胞培養裝置，溫度設置為37.2℃，二氧化碳濃度設置為5％，濕度95％，平衡30分鐘，根據不同細胞種類設置拍攝參數；

(3)動態觀察細胞遷移：將加入細胞、趨化物的觀察細胞遷移裝置放入活細胞工作站中的培養室內，調整顯微鏡物鏡至觀察區域中遷移的細胞，CellSense軟件中觀察并記錄細胞的動態遷移過程。

5.根據權利要求4所述的一種動態觀察細胞遷移的方法，其特征在于：所述步驟(2)中拍攝參數，快速遷移細胞設置拍攝總時長為1小時，拍攝間隔為5秒；慢速遷移細胞設置拍攝總時長為10小時，攝間隔為50秒。

6.根據權利要求5所述的一種動態觀察細胞遷移的方法，其特征在于：快速遷移細胞為中性粒細胞，慢速遷移細胞為血管內皮細胞。